6124 _6125_6126_AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG và IgM_updated 12.04.2021

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA / IgG / IgM
Ref 6124 / 6125 / 6126


Hướng dẫn sử dụng
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA / IgG / IgM

Phiên bản V.001 2020-10-05

Cập nhật
Phiên bản hiện tại

V.001 - 2020-10-05

Phiên bản trước

-

Cập nhật trong mục

-

Lý do cập nhật

-

AESKU.DIAGNOSTICS GmbH & Co. KG
Mikroforum Ring 2
55234 Wendelsheim, Germany
Tel: +49-6734-9622-0
Fax: +49-6734-9622-2222

www.aesku.com


Nội dung


1 Mục đích sử dụng
Các xét nghiệm AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG và IgM là các xét nghiệm miễn dịch định tính
và định lượng để xác định các kháng thể IgA, IgG hoặc IgM người có trong huyết thanh hoặc huyết tương
hướng vào vùng S1 của spike protein của SARS-CoV-2. Các xét nghiệm AESKULISA® SARS-CoV-2 S1
IgM và IgA hỗ trợ phát hiện các bệnh nhiễm trùng cấp tính. Xét nghiệm AESKULISA® SARS-CoV-2 S1
IgG phục vụ cho việc xác nhận có tiếp xúc với mầm bệnh và hỗ trợ xác định tình trạng miễn dịch.

2 Sự liên quan đến chuẩn đốn
SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2) là một loại coronavirus gây bệnh ở người,
liên quan đến SARS và là tác nhân gây ra COVID19 (bệnh do virus corona 2019). Một loạt các protein
màng khác nhau như glycosylated spike protein (S), protein vỏ (E) và protein nền (M) được tích hợp trong
vỏ virus. Capsid bên trong của virus có đường kính từ 120 đến 160 nm được cấu tạo bởi nucleoprotein (N)
và (+) ssRNA. spike protein (S) có thể được chia thành các miền S1 và S2. Miền S1 tương tác với thụ thể
ACE2 (angiotensin converting enzyme 2) nằm trên bề mặt của tế bào chủ, trong khi miền S2 hỗ trợ quá
trình dung hợp virus với màng tế bào.
Sự lây truyền chủ yếu qua hạt khí dung và các giọt bắn. Nói chung, cũng có thể lây nhiễm qua các bề mặt
bị ô nhiễm. Thời gian ủ bệnh thường từ 5 đến 6 ngày, nhưng có thể kéo dài đến 14 ngày. Có thể lây nhiễm
sang người khác trong thời gian ủ bệnh mặc dù tình trạng sức khỏe rõ ràng vẫn khỏe mạnh.
Diễn biến của bệnh thường không đặc hiệu và rất khác nhau. Ngoài các bệnh nhiễm trùng không rõ ràng về
mặt lâm sàng, các bệnh chủ yếu từ nhẹ đến trung bình với các triệu chứng giống cúm và ho khan đã được
mơ tả. Bệnh có biểu hiện ở hầu hết các trường hợp là sốt, đau họng, nhức đầu, đau người và viêm phổi nhẹ.
Tuy nhiên, trong một số trường hợp, các diễn biến nghiêm trọng với các hội chứng hơ hấp cấp tính đã được
mơ tả. Viêm phổi đe dọa tính mạng, đơi khi có thể gây tử vong, đặc biệt có thể xảy ra ở những bệnh nhân

có nguy cơ cao mắc bệnh trước đó hoặc ở những người trên 60 tuổi. Trong trường hợp nhẹ, các triệu chứng
thường giảm dần trong vòng hai tuần. Các đợt điều trị bệnh nghiêm trọng có thể kéo dài từ ba đến sáu tuần.
Vì các triệu chứng lâm sàng của COVID19 rất khác nhau, nên chẩn đoán trong phịng thí nghiệm có tầm
quan trọng đặc biệt. Cả hai phương pháp phát hiện trực tiếp và gián tiếp đều có sẵn cho mục đích này.
Trong những ngày đầu sau khi lây nhiễm, phương pháp phát hiện mầm bệnh trực tiếp bằng RT-PCR (phản
ứng chuỗi polymerase) từ đờm, dịch tiết khí quản, rửa phế quản (BAL) hoặc ngốy mũi họng là phương
pháp được lựa chọn. Việc phát hiện mầm bệnh gián tiếp thông qua xác định huyết thanh học kháng thể IgA,
IgG hoặc IgM bổ sung cho việc phát hiện trực tiếp và hỗ trợ chẩn đoán COVID19 trong q trình bệnh.
Ngồi ra, việc chứng minh các kháng thể phục vụ cho việc xác định tình trạng miễn dịch, xác định các cá
nhân đã tiếp xúc trước đó với mầm bệnh cũng như cho các nghiên cứu dịch tễ học.

3 Nguyên tắc xét nghiệm AESKULISA®
AESKULISA® (Thử nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme của AESKU) là một xét nghiệm miễn
dịch, đặc biệt thích hợp để xác định kháng thể. Phản ứng dựa trên sự tương tác cụ thể của các kháng thể với
kháng nguyên tương ứng. Các dải xét nghiệm của khay vi giếng AESKULISA® được phủ bằng các kháng
nguyên đặc biệt của mầm bệnh quan tâm. Nếu các kháng thể trong mẫu bệnh có mặt, chúng sẽ liên kết với
kháng nguyên cố định. Một kháng thể thứ cấp, đã được liên hợp với enzyme peroxidase, phát hiện và liên
kết với phức hợp miễn dịch. Chất nền khơng màu sau đó được chuyển thành sản phẩm có màu. Cường độ
tín hiệu của sản phẩm phản ứng này tỷ lệ với hoạt tính kháng thể trong mẫu và được đo bằng phương pháp
đo quang.

4 Kháng nguyên
Việc phát hiện kháng thể bằng xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG và IgM dựa
trên vùng S1 của spike protein của SARS-CoV-2.

5 Thành phần xét nghiệm AESKULISA®
Thành phần xét nghiệm
Dải vi giếng có thể bẻ gãy MP mỗi dải có 8 giếng đơn tráng

Màu dung dịch

-

Màu của nắp
-

Số lượng
12 dải


kháng nguyên (tổng cộng 96 giếng) trong 1 khung.
Vật liệu phủ dành riêng cho thử nghiệm đã bị bất hoạt.
Bộ hiệu chuẩn A - D CAL (sẵn sàng sử dụng)
Huyết thanh người hoặc kháng thể khảm trong dung dịch chứa
protein (BSA); có màu; chất bảo quản ProClin.
Hoạt tính kháng thể của mẫu chuẩn được ghi trên nhãn của
chúng và trên giấy chứng nhận kiểm soát chất lượng của xét
nghiệm miễn dịch AESKULISA®.
Chứng dương CON + (sẵn sàng sử dụng)
Huyết thanh người hoặc kháng thể khảm trong dung dịch chứa
protein (BSA); có màu; chất bảo quản ProClin
Chứng âm CON - (sẵn sàng sử dụng)
Huyết thanh người hoặc kháng thể khảm trong dung dịch chứa
protein (BSA); có màu; chất bảo quản ProClin
Bộ đệm mẫu SB 5x, nồng độ 5x.
Dung dịch chứa protein (BSA); có màu; chất bảo quản <0,1%
natri azit.
Bộ đệm mẫu của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgM có
chứa chất hấp thụ Rf.
Bộ đệm rửa WASHB 50x, nồng độ 50x.
Dung dịch với tween 20; có màu; chất bảo quản ProClin.

Liên hợp IgA, IgG hoặc IgM kháng người CONJ
(sẵn sàng sử dụng)
Kháng thể đa dòng IgA, IgG hoặc IgM của người, được liên
hợp với horseradish peroxidase, ổn định với dung dịch chứa
protein (BSA); có màu; chất bảo quản ProClin.
Cơ chất SUB (sẵn sàng sử dụng)
TMB / H2O2 ổn định.
Dung dịch dừng STOP (sẵn sàng sử dụng) Axit clohydric 1 M
(HCl).
Giấy chứng nhận kiểm soát chất lượng
Hướng dẫn sử dụng

vàng*

trắng

4 x 1,5 ml

vàng*

đỏ

1 x 1,5 ml

vàng*

Xanh
lá

1 x 1,5 ml

Trắng

1 x 20 ml

IgG, IgA:
Vàng
IgM: xanh lá
Xanh lá

Trắng

IgA: đỏ
IgG: xanh
dương
IgM: xanh lá

IgA: đỏ
IgG: xanh
dương
IgM: xanh lá

không màu

Đen

không màu
-

Trắng

-

1 x 20 ml
1 x 15 ml

1 x 15 ml
1 x 15 ml
1 bản
1 bản

* Cường độ màu ngày càng tăng theo hoạt tính của kháng thể.

6 Vật liệu u cầu, nhưng khơng cung cấp
- Dụng cụ thí nghiệm thông thường bao gồm dụng cụ thủy tinh (xi lanh 100 - 1000 ml), ống
nghiệm để pha loãng, máy vortex, pipet chính xác (10, 100, 200, 500, 1000 µl) hoặc pipet đa năng
có thể điều chỉnh (100 - 1000 µl).
- Máy đo quang dùng cho khay vi giếng có bộ lọc, bước sóng 450 nm, bước sóng tham chiếu
khuyến nghị 600 nm - 690 nm (ví dụ: 620 nm)
- Thiết bị rửa khay vi giếng (pipet 300 µl lặp lại hoặc đa kênh hoặc hệ thống rửa tự động)
- Giấy hấp phụ
- Nước cất tinh khiết.
Xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được thiết kế để sử dụng với nước tinh khiết theo định nghĩa của
Dược điển Hoa Kỳ (USP 26 - NF 21) và Dược điển Châu Âu (Eur. Ph. 4th ed.).

7 Bảo quản và ổn định


Các dải vi giếng xét nghiệm phải luôn được bảo quản cùng với chất hút ẩm trong túi nhôm được niêm
phong đúng cách. Nếu được bảo quản đúng cách trong vật chứa ban đầu và ở 2 - 8 °C / 35 - 46 °F, tất cả
thuốc thử và khay vi giếng đều ổn định - ngay cả sau khi mở - cho đến khi hết hạn sử dụng được ghi trên

nhãn. Các dung dịch đã pha loãng ổn định ở 2-8 °C / 35-46 °F trong bốn tuần.

8 Quy trình xét nghiệm AESKULISA®
8.1

Hướng dẫn sử dụng chung

Chỉ có thể đạt được kết quả tối ưu nếu các hướng dẫn được tuân thủ nghiêm ngặt. Chỉ sử dụng thuốc thử
AESKULISA® khi sử dụng xét nghiệm miễn dịch AESKULISA®. Các thành phần xét nghiệm không được đổi
thành thuốc thử của các nhà sản xuất khác.
Các khay vi giếng, mẫu chuẩn, mẫu chứng và liên hợp của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® là các xét
nghiệm và lô cụ thể và không được sử dụng cho các lô khác. Các đánh giá về mẫu chuẩn và mẫu chứng
được chỉ ra trên chứng chỉ kiểm tra chất lượng được cung cấp cùng với bộ thử nghiệm AESKULISA®. Dung
dịch rửa, chất nền và dung dịch dừng có thể được sử dụng cho tất cả các xét nghiệm miễn dịch
AESKULISA® bất kể lơ và xét nghiệm.
Dung dịch đệm mẫu của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgA và IgG có thể được sử dụng cho tất cả
các xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgA và IgG (REF 6xxx) bất kể lô và xét nghiệm. Bộ đệm mẫu
của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgM có chứa chất hấp thụ Rf và có thể được sử dụng cho tất cả các
xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgM để chẩn đốn các bệnh truyền nhiễm (REF 6xxx) bất kể lô và xét
nghiệm.
Để tránh nhiễm bẩn, nên sử dụng kỹ thuật vô trùng khi lấy mẫu ra khỏi ống thuốc thử. Không bao giờ được
dùng pipet hút dung dịch liên hợp và dung dịch cơ chất bằng các đầu tip bị nhiễm thuốc thử khác. Độ tái
lập của kết quả thử nghiệm phụ thuộc vào sự đồng nhất kỹ lưỡng của các thuốc thử. Do đó, cần khuấy trộn
dung dịch thuốc thử và dung dịch mẫu trước khi sử dụng. Việc pha loãng khơng thích hợp có thể làm mất
độ nhạy.
Đảm bảo dùng pipet cẩn thận và tuân thủ thời gian và nhiệt độ ủ đã cho. Việc rửa đầy đủ sẽ tránh được sự
không đặc hiệu của xét nghiệm.
Tránh để thuốc thử tiếp xúc với ánh sáng mạnh trong quá trình bảo quản và ủ. Không bao giờ để các thành
phận xét nghiệm đạt nhiệt độ cao hơn 37 °C / 99 °F. Thuốc thử phải được đậy kín sau khi sử dụng để tránh
bay hơi và nhiễm bẩn. Chú ý không để lẫn lộn các nắp lọ. Các thành phần xét nghiệm không được đạt nhiệt

độ trên 37 ° C.
Các lần chạy xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® chỉ có giá trị nếu các tiêu chí xác nhận được đáp ứng.

8.2

Chuẩn bị thuốc thử

Tất cả các thành phần và khay vi giếng phải được đưa về nhiệt độ phòng (20 - 25 °C / 68 - 77 °F) trước khi
sử dụng. Thuốc thử dạng lỏng phải được trộn đều. Để pha loãng dung dịch đệm đậm đặc, chỉ sử dụng đồ
thủy tinh sạch.
8.2.1

Dải vi giếng (sẵn sàng sử dụng)

Các dải vi giếng được dán nhãn bằng chữ viết tắt của kháng nguyên được phủ.
8.2.2

Chuẩn (sẵn sàng sử dụng)

Các chất chuẩn CAL A - CAL D đã sẵn sàng để sử dụng và khơng được pha lỗng thêm. Chất chuẩn phải
được sử dụng cho mỗi lần chạy xét nghiệm, không phụ thuộc vào số lượng dải vi giếng được sử dụng.

8.2.3

Chứng (sẵn sàng sử dụng)


Đối chứng dương CON + và đối chứng âm CON– đã sẵn sàng để sử dụng và không được pha loãng thêm.
Các chứng phải được sử dụng cho mỗi lần chạy thử nghiệm, không phụ thuộc vào số lượng dải vi giếng
được sử dụng.

Tùy thuộc vào hướng dẫn quốc gia, các phịng thí nghiệm cũng có thể xác nhận các chứng của riêng mình và
sử dụng chúng theo cách khác.
8.2.4

Dung dịch đệm mẫu (đậm đặc 5x)

Dung dịch đệm mẫu đậm đặc phải được pha loãng theo tỷ lệ 1: 5 với nước cất trước khi sử dụng (ví dụ: 20
ml + 80 ml). Dung dịch đệm mẫu của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgM có chứa chất hấp thụ Rf.
8.2.5

Dung dich đệm rửa (đậm đặc 50x)

Dung dịch đệm rửa đậm đặc phải được pha loãng 1:50 với nước cất trước khi sử dụng (ví dụ: 20 ml + 980
ml).
8.2.6

Liên hợp IgA, IgG hoặc IgM POD người (sẵn sàng sử dụng)

Dung dịch liên hợp đã sẵn sàng để sử dụng.
8.2.7 Cơ chất (sẵn sàng sử dụng)
Chất nền TMB phải luôn được pipet với các đầu tip hoàn toàn mới để tránh nhiễm bẩn.
Tránh để dung dịch TMB tiếp xúc mạnh với ánh sáng.
8.2.8

Dung dịch dừng (sẵn sàng sử dụng)

Giải pháp dừng đã sẵn sàng để sử dụng

8.3

Chuẩn bị mẫu

8.3.1 Vật liệu mẫu
Nên sử dụng các mẫu huyết thanh mới thu thập hoặc mẫu huyết tương EDTA. Không nên sử dụng các mẫu
nhiễm vi khuẩn, mỡ máu, tan huyết hoặc vi khuẩn. Các mẫu có các hạt phải được làm sạch bằng cách ly
tâm (<1000 x g). Phần nổi phía trên nên được lấy ra và sử dụng để phân tích thêm. Mẫu khơng được bất
hoạt nhiệt.
8.3.2

Pha lỗng mẫu

Các mẫu phải được pha lỗng 1: 101 (e. G. 10 µl + 1000 µl) với 1x dung dịch đệm mẫu và trộn kỹ.
8.3.3

Hấp thụ trước các yếu tố dạng thấp với AESKULISA® IgM

Yếu tố dạng thấp (Rf) là các tự kháng thể chủ yếu thuộc lớp IgM, liên kết tốt hơn với các phức hợp miễn
dịch IgG. Việc chứng minh các kháng thể IgM đặc hiệu với mầm bệnh có thể dẫn đến kết quả xét nghiệm
dương tính giả do sự hiện diện của các yếu tố dạng thấp không đặc hiệu. Hơn nữa, các kháng thể IgM đặc
hiệu với mầm bệnh liên kết yếu có thể bị thay thế bởi các kháng thể IgG liên kết mạnh hơn dẫn đến kết quả
xét nghiệm IgM âm tính giả. Do đó, đệm mẫu của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgM có chứa chất
hấp thụ Rf đặc hiệu. Sự hấp thụ Rf được thực hiện bằng cách pha loãng mẫu của bệnh nhân trong dung dịch
đệm pha lỗng 1x của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® IgM và ủ sau đó trong tối thiểu 15 phút ở nhiệt
độ phòng
8.3.4 Bảo quản mẫu
Các mẫu bệnh nên được sử dụng trong vịng 8 giờ, được bảo quản kín ở 2 - 8 °C / 35 - 46 °F trong vịng 48
giờ. Có thể bảo quản lâu hơn ở nhiệt độ ≤ -20 °C / -4 °F. Tránh đông lạnh và tan băng lặp đi lặp lại.

8.4

Thông số kiểm tra

8.4.1 Bố trí xét nghiệm
Tùy thuộc vào việc đánh giá xét nghiệm định lượng hoặc định tính khi sử dụng xét nghiệm miễn dịch
AESKULISA® mà sử dụng sơ đồ bố trí sau:


Đánh giá định lượng
1

2

A

CAL A

P3

B

CAL B

C

1

2

A

CON–

P5

P4

B

CAL B

P6

CAL C

P5

C

CAL B

…

D

CAL D

P6

D

CON+

E

CON–

…

E

P1

F

CON+

F

P2

G

P1

G

P3

H

P2

H

P4

8.4.2

3

Đánh giá định tính
4

3

CAL A

Chuẩn A

CON–

Chứng âm

CAL B

Chuẩn B

CAL B

Chứng ngưỡng

CAL C

Chuẩn C

CON+

Chứng dương

CAL D

Chuẩn D

CON–

Chứng âm

CON+

Chứng dương

4

Quy trình xét nghiệm

Đặt số lượng vi giếng cần thiết vào khung và chuẩn bị tờ hướng dẫn sửdụng. Đối với quy trình thủ cơng,
khuyến khích tiến hành ở nhiệt độ phịng.
Bước

1. Thêm chuẩn, chứng và mẫu

đã pha lỗng

Kí hiệu

Miêu tả

Thêm 100 µl mẫu chuẩn, mẫu chứng và mẫu đã pha
loãng sẵn sàng sử dụng vào các giếng thích hợp.

Ủ trong 30 +/- 3 phút ở 20 - 32 °C / 68 - 89 °F.
2. Ủ mẫu

3. Rửa 3 lần

4. Thêm liên hợp

Hút bỏ dung dịch, đổ đầy lại với 300 µl dung dịch đệm
rửa 1x vào mỗi giếng, hút bỏ dung dịch rửa và lặp lại
quy trình rửa hai lần nữa; làm khơ bằng cách chạm khay
vi giếng trên giấy thấm

Thêm 100 µl dung dịch liên hợp sẵn sàng sử dụng
vào các giếng thích hợp


Ủ trong 30 +/- 3 phút ở 20 - 32 °C / 68 - 89 °F.
5. Ủ liên hợp

6. Rửa 3 lần

7. Thêm cơ chất

8. Ủ cơ chất

Hút bỏ dung dịch, đổ đầy 300 µl dung dịch đệm rửa 1x
vào mỗi giếng, hút bỏ dung dịch rửa và lặp lại quy trình
rửa hai lần nữa; làm khơ bằng cách chạm khay vi giếng
trên khăn giấy.

Thêm 100 µl dung dịch cơ chất sẵn sàng sử
dụng vào các giếng thích hợp.

Ủ trong 30 +/- 3 phút ở 20 - 32 °C / 68 - 89 °F.
Tránh tiếp xúc với ánh sáng mạnh.

9. Thêm dung dịch dừng

Thêm 100 µl dung dịch dừng sẵn sàng sử dụng vào các
giếng thích hợp theo thứ tự như khi dùng pipet với cơ chất.

10. Ủ

Tùy chọn: Ủ trong 5 phút.

11. Lắc

Lắc kỹ khay vi giếng trong 5 giây.

12. Phân tích

Đọc mật độ quang học (OD) trong vịng 30 phút ở bước
sóng 450 nm so với bước sóng chuẩn được khuyến nghị là
620 nm.

8.5

Quy trình xét nghiệm tự động

Q trình tự động hóa xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được thực hiện tương tự như sử dụng thủ công.
Quy trình thử nghiệm quy định phải được tuân thủ. Xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được đánh giá để
sử dụng với nhiều loại thiết bị khác nhau; các phân tích xét nghiệm tương ứng có sẵn theo yêu cầu. Để xử
lý tự động xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® trên các dụng cụ khác, nên đánh giá các hồ sơ xét nghiệm
bởi nhà cung cấp bộ xét nghiệm phối hợp với nhà cung cấp dụng cụ. Việc xử lý tự động chính xác xét
nghiệm miễn dịch AESKULISA® cuối cùng phải được người dùng xác nhận.

9 Đánh giá xét nghiệm AESKULISA®
9.1

Tiêu chuẩn hóa

Các chuẩn các xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG và IgM được thực hiện bằng
cách sử dụng huyết thanh tham chiếu nội bộ. Kết quả kiểm tra định lượng được biểu thị bằng U / ml.


9.2

Đánh giá định lượng

Nói chung, đánh giá dữ liệu định lượng được khuyến khích khi sử dụng xét nghiệm miễn dịch
AESKULISA®. Để tạo đường chuẩn, các tín hiệu đo quang học (mật độ quang, OD) của các chất chuẩn

được vẽ đồ thị dựa trên hoạt tính kháng thể của chúng (tính bằng IU/ml hoặc U/ml). Hoạt tính kháng thể
của chuẩn được chỉ ra trên giấy chứng nhận kiểm soát chất lượng cụ thể theo lô được cung cấp cùng với bộ
xét nghiệm AESKULISA®. Để có kết quả tối ưu, nên sử dụng tọa độ log/lin và phù hợp với logistic 4 tham
số (4 PL). Sử dụng đường cong tạo ra, các hoạt tính kháng thể của các mẫu có thể được đánh giá trực tiếp
từ các tín hiệu đo quang học.

9.3

Phạm vi nghi ngờ

Phạm vi nghi ngờ của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được chỉ định trên các chứng chỉ kiểm tra chất
lượng được cung cấp cùng với bộ xét nghiệm và cho biết phạm vi kết quả xét nghiệm ở khoảng nghi ngờ.
Các giá trị dưới phạm vi này cho biết kết quả xét nghiệm âm tính; các giá trị trên phạm vi này được hiểu là
dương tính. Do hậu quả của các chương trình tiêm chủng và tỷ lệ huyết thanh khác nhau ở các quốc gia
riêng lẻ, chúng tôi khuyên bạn nên xác minh phạm vi nghi ngờ bằng cách phân tích riêng và điều chỉnh nếu
cần.

9.4

Phạm vi đo

Phạm vi đo của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được ghi rõ trên chứng chỉ kiểm tra chất lượng được
cung cấp cùng với bộ xét nghiệm. Tính tuyến tính của độ pha lỗng cũng như độ chính xác cao và độ tái lập
của các kết quả thử nghiệm đã được chứng minh trong phạm vi này trong các nghiên cứu đánh giá tồn
diện. Các mẫu có kết quả thử nghiệm cao hơn giới hạn định lượng trên phải được báo cáo là> max. Các
mẫu có kết quả xét nghiệm thấp hơn giới hạn định lượng dưới hơn phải được báo cáo là trường hợp mẫu bệnh phẩm cho kết quả xét nghiệm cao hơn giới hạn định lượng trên, mẫu đó có thể được
thử nghiệm ở độ pha lỗng cao hơn. Hoạt tính kháng thể thu được sau đó phải được nhân với hệ số pha
lỗng bổ sung.

9.5

Đánh giá định tính

Việc đánh giá dữ liệu định tính khi sử dụng xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được thực hiện bằng cách
so sánh tín hiệu đo quang học (mật độ quang, OD) của mẫu bệnh nhân với tín hiệu đo quang trung bình của
mẫu hiệu chuẩn B (mẫu chuẩn ngưỡng CAL B) được thử nghiệm hai lần . Nếu mẫu của bệnh nhân đạt đến
giá trị OD trong phạm vi nghi ngờ +/- 20% xung quanh OD trung bình của mẫu chuẩn ngưỡng CAL B, mẫu
được coi là nghi ngờ. Các mẫu có giá trị OD cao hơn được đánh giá là dương tính, các mẫu có giá trị OD
thấp hơn được đánh giá là âm tính.

9.6

Tiêu chí về tính hợp lệ

Các tiêu chí hợp lệ sau phải được đáp ứng để xét nghiệm được xem là hợp lệ:
- OD CAL A <0,3
- OD CAL A - OD CAL D> 1,3
- Chứng âm phải được đánh giá là âm tính.
- Chứng dương khơng được đánh giá là âm tính.
- Bằng cách sử dụng xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® theo phương pháp định lượng, đối chứng dương
phải thể hiện hoạt tính kháng thể trong phạm vi hiệu lực được ghi trên giấy chứng nhận kiểm sốt chất
lượng của AESKULISA®
- Bằng cách sử dụng xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® theo phương pháp định tính, sự thay đổi của các
giá trị OD của mẫu ngưỡng B, được thử nghiệm hai lần, không được cao hơn 20%.
Nếu các tiêu chí này khơng được đáp ứng, thử nghiệm là không hợp lệ và phải được thực hiện lại.


Trong trường hợp chạy thử không hợp lệ, ngày hết hạn của thuốc thử (sẵn sàng sử dụng), điều kiện bảo

quản, thời gian và nhiệt độ ủ, pipet, máy rửa với chu kỳ rửa, máy đo quang cũng như các thiết bị khác được
sử dụng phải được xác minh. Nếu khơng xác định được ngun nhân có thể giải thích cho q trình chạy
xét nghiệm khơng hợp lệ hoặc các kết quả sai khác, vui lòng liên hệ với nhà cung cấp hoặc nhà sản xuất bộ
thử nghiệm.

9.7

Giải thích kết quả xét nghiệm

Kết quả xét nghiệm dương tính trong xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® xác nhận sự hiện diện của các
kháng thể đặc hiệu. Kết quả âm tính chỉ ra rằng khơng có hoạt tính kháng thể có liên quan về mặt lâm sàng
chống lại mầm bệnh trong mẫu bệnh phẩm, nhưng không loại trừ khả năng nhiễm trùng cấp tính. Trong
trường hợp kết quả ở khoảng nghi ngờ, khơng thể đánh giá đáng tin cậy. Chẩn đoán xác định chỉ có thể đạt
được bằng cách xét nghiệm song song các mẫu huyết thanh đã ghép đôi, được lấy trong khoảng thời gian từ
một đến hai tuần.
Trong quá trình nhiễm trùng nguyên phát, phản ứng dịch thể được đặc trưng bởi việc sản xuất các kháng
thể IgM, IgA và IgG. Trong khi hoạt động của kháng thể IgM và IgA giảm một vài tuần sau khi nhiễm
bệnh, thì hoạt động của kháng thể IgG vẫn tồn tại lâu hơn đáng kể.
Phản ứng chéo của các kháng thể chống lại các Coronavirus khác, đặc biệt là SARS-CoV-1, không thể bị
loại trừ và có thể làm phức tạp việc giải thích các kết quả xét nghiệm huyết thanh học.
Sơ đồ diễn giải cơ bản về các kết quả xét nghiệm huyết thanh học
Hoạt tính
IgM

Hoạt tính
IgA

Hoạt tính
IgG

Âm tính

Âm tính

Âm tính

Dương tính

Dương tính

Dương tính

Âm tính

Âm tính

Dương tính

Đánh giá
Khơng có kháng thể đặc hiệu nào có thể phát hiện được.
Trong trường hợp có nghi ngờ hợp lý, nên làm xét nghiệm
khác sau một hoặc hai tuần.
Chỉ định nhiễm trùng cấp tính.
Để xác nhận, khuyến nghị các cuộc điều tra
thêm.
Dấu hiệu của nhiễm trùng / giai đoạn trễ

Việc giải thích kết quả xét nghiệm phải được xem xét kết hợp với bệnh cảnh lâm sàng của bệnh nhân. Chẩn
đốn khơng nên chỉ dựa trên kết quả của xét nghiệm đã thực hiện, mà phải được thực hiện sau khi tất cả các
phát hiện lâm sàng và xét nghiệm đã được đánh giá. Để xác nhận, cần tiến hành các cuộc điều tra thêm.

10 THÔNG SỐ KỸ THUẬT AESKULISA®
10.1 Độ nhạy và độ đặc hiệu của phân tích
Độ nhạy phân tích của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được đánh giá bằng cách phân tích nhiều mẫu
dương tính.

Độ nhạy phân tích
®

AESKULISA SARS-CoV-2 S1 IgA
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM

1.80 U/ml
1.71 U/ml
2.17 U/ml

Tính đặc hiệu phân tích của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được đánh giá bằng cách bổ sung các chất
có khả năng gây nhiễu vào mẫu và xác định ảnh hưởng của chúng đối với phép đo. Không quan sát thấy
ảnh hưởng đáng kể của hemoglobin (lên đến 800 mg/dl), bilirubin (lên đến 20 mg/dl), liên hợp bilirubin
(lên đến 20 mg/dl) và triglycerid (lên đến 3000 mg/dl) đối với kết quả xét nghiệm.

10.2 Độ nhạy và độ đặc hiệu


Độ nhạy của xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG (IgA / IgM) được đánh giá bằng
cách phân tích 69 (39/16) mẫu từ những bệnh nhân nghi ngờ nhiễm SARS-CoV-2 và phát hiện kháng thể
IgG (IgA / IgM) dương tính. Độ đặc hiệu của AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG (IgA / IgM) được xác
định bằng cách phân tích 110 (99/96) mẫu từ những người hiến máu khỏe mạnh và xét nghiệm kháng thể
IgG (IgA / IgM) âm tính. Kết quả của xét nghiệm AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG (IgA / IgM) được so

sánh bằng cách sử dụng xét nghiệm miễn dịch SARS-CoV-2 IgG (IgA / IgM) của một nhà sản xuất Châu
Âu làm tham chiếu
Độ nhạy
®

Độ đặc hiệu

95 %
98.6 %
99 %

AESKULISA SARS-CoV-2 S1 IgA
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM

99 %
99 %
99 %

Huyết thanh được phân loại thì khoảng nghi ngở khơng được tính đến độ nhạy và độ đặc hiệu.

10.3 Phạm vi tham chiếu của các cá thể khỏe mạnh
Xét nghiệm mẫu huyết thanh từ những người hiến máu ngẫu nhiên bằng xét nghiệm miễn dịch AESKULISA®
SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG và IgM cho kết quả phân bổ như sau:

AESKULISA®

Số lượng mẫu

Âm tính

Khoảng nghi
ngờ

Dương tính

SARS-CoV-2 S1 IgA

100

100 (100 %)

0 (0.0 %)

0 (0.0 %)

SARS-CoV-2 S1 IgG

100

100 (100 %)

0 (0.0 %)

0 (0.0 %)

SARS-CoV-2 S1 IgM

100

98 (98.0 %)

2 (2.0 %)

0 (0.0 %)

10.4 Độ chính xác
Độ chính xác và độ tái lập của các kết quả xét nghiệm thu được với AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA,
IgG và IgM được đánh giá bằng cách xác định độ chính xác trong và giữa các xét nghiệm cũng như phương
sai giữa các lơ bằng cách phân tích nhiều mẫu của các hoạt tính kháng thể khác nhau.

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA
Mẫu

Giá trị (OD)

Hoạt tính IgA

CV nội khảo
nghiệm (U/ml)

CV liên khảo
nghiệm (U/ml)

CV giữa các lô
(U/ml)

Huyết thanh 1

0.165

3.5 U/ml

4.1 %

5.2 %

5.5 %

Huyết thanh 2

0.352

8.7 U/ml

2.7 %

3.4 %

3.2 %

Huyết thanh 3

0.774

22.5 U/ml

2.9 %

4.5 %

5.7 %

Huyết thanh 4

0.997

31.0 U/ml

2.7%

5.1 %

6.5 %

Huyết thanh 5

1.611

60.3 U/ml

4.8 %

7.5 %

7.0 %

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG

Giá trị (OD)

Hoạt tính IgG

CV nội khảo
nghiệm (U/ml)

CV liên khảo
nghiệm (U/ml)

CV giữa các lô
(U/ml)

Huyết thanh 1

0.176

3.0 U/ml

4.1 %

7.5 %

12.7 %

Huyết thanh 2

0.733

17.9 U/ml

2.6 %

8.3 %

13.1 %

Huyết thanh 3

0.937

24.9 U/ml

3.3 %

6.3 %

12.3 %

Huyết thanh 4

1.421

46.9 U/ml

2.7%

6.5 %

10.2 %

Huyết thanh 5

1.891

76.0 U/ml

3.8 %

4.4 %

5.4 %

Giá trị (OD)

Hoạt tính IgM

CV nội khảo
nghiệm (U/ml)

CV liên khảo
nghiệm (U/ml)

CV giữa các lô
(U/ml)

Huyết thanh 1

0.199

4.5 U/ml

5.3 %

6.9 %

18.4 %

Huyết thanh 2

0.392

10.0 U/ml

3.0 %

7.2 %

4.4 %

Huyết thanh 3

0.672

19.0 U/ml

3.3 %

6.9 %

10.1 %

Huyết thanh 4

1.029

32.6 U/ml

3.3 %

5.9 %

9.1 %

Huyết thanh 5

1.538

59.7 U/ml

2.6 %

3.9 %

5.6 %

Mẫu

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM
Mẫu

11 Biện pháp an tồn
11.1 Khuyến nghị và Biện pháp phịng ngừa
Xét nghiệm miễn dịch AESKULISA® được thiết kế dành riêng cho việc sử dụng chẩn đốn in vitro bởi
nhân viên có trình độ chun mơn, những người được đào tạo, tư vấn đặc biệt và quen thuộc với các
phương pháp phòng thí nghiệm. Tất cả thuốc thử và mẫu người phải được xử lý cẩn thận, sử dụng thực
hành phịng thí nghiệm tốt đã được thiết lập. Nếu sản phẩm bị hỏng hoặc thông tin sản phẩm - bao gồm cả
nhãn - sai hoặc khơng chính xác, vui lịng liên hệ với nhà sản xuất hoặc nhà cung cấp bộ kit.
Không dùng pipet bằng miệng. Không hút thuốc, ăn hoặc uống trong các khu vực xử lý mẫu hoặc thuốc
thử. Tránh tiếp xúc trực tiếp bằng cách đeo găng tay dùng một lần, áo khốc phịng thí nghiệm và kính bảo
hộ trong khi xử lý thuốc thử hoặc mẫu. Rửa tay thật sạch sau đó.
Sản phẩm này chứa các dung dịch pha loãng của các mẫu huyết thanh người. Mặc dù tất cả các mẫu huyết
thanh đã được xét nghiệm và phát hiện âm tính với kháng HIV 1 và 2-ab, HBs-Ag (Kháng nguyên bề mặt
virus viêm gan B) và anti-HCV-ab, nhưng vẫn nên được coi là có khả năng lây nhiễm. Sản phẩm này chứa
các dung dịch pha lỗng có nguồn gốc động vật. Vui lòng tuân thủ các yêu cầu luật định có liên quan.
Bộ sản phẩm này có chứa các thành phần nguy hiểm tiềm ẩn, có thể gây kích ứng cho mắt và da.
Các thành phần thử nghiệm riêng lẻ có chứa natri azit (NaN3) như một chất bảo quản. Natri azide có thể
độc nếu ăn phải hoặc bị hấp thụ bởi da hoặc mắt. Natri azit có thể phản ứng với chì và đường ống dẫn nước
bằng đồng để tạo thành azit kim loại dễ nổ. Khi xử lý, hãy xả với một lượng lớn nước để ngăn chặn sự tích
tụ azit.
Các chất chuẩn và chứng cũng như các mẫu bệnh phẩm phải được coi là có khả năng lây nhiễm và được xử
lý theo luật quốc gia. Các mẫu bệnh và các vật liệu có khả năng lây nhiễm khác phải được khử nhiễm sau khi
chạy thử nghiệm.
Thuốc thử phải được bảo quản an toàn và không để trẻ em tiếp cận.

11.2 Thải bỏ
Để khử nhiễm và xử lý, vui lòng tuân theo các khuyến nghị của CDC cũng như các yêu cầu luật định liên
quan của địa phương và quốc gia.

12 Tài liệu tham khảo
Acter, T., Uddin, N., Das, J., Akhter, A., Choudhury, T.R., Kim, S. (2020) Evolution of severe acute
respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) as coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic: A
global health emergency. Sci. Total Environ. 730, 138996.
Azkur, A. K., Akdis, M., Azkur, D., Sokolowska, M., van de Veen, W., Brüggen, M.-C., O'Mahony, L.,
Gao, Y., Nadeau, K., Akdis, C. A. (2020) Immune response to SARS-CoV-2 and mechanisms of
immunopathological changes in COVID-19. Allergy 75, 1564 – 81.
Guo, L. et al. (2020) Profiling Early Humoral Response to Diagnose Novel Coronavirus Disease (COVID19). Clin. Infect. Dis. 71, 778 – 85.
Lai, C.C., Shih, T.P., Ko, W.C., Tang, H.J., Hsueh, P.R. (2020) Severe acute respiratory syndrome
coronavirus 2 (SARS-CoV-2) and coronavirus disease-2019 (COVID-19): The epidemic and the
challenges. Int. J. Antimicrob. Agents. 55, 105924.
Satarker, S., Nampoothiri, M. (2020) Structural Proteins in Severe Acute Respiratory Syndrome
Coronavirus-2. Arch. Med. Res. 51, 482 – 91.
Wu, D., Wu, T., Liu, Q., Yang, Z. (2020) The SARS-CoV-2 outbreak: What we know. Int. J. Infect. Dis. 94,
44 – 8.


Các ký hiệu trên nhãn

Để sử dụng chuẩn đoán in vitro
Mã sản phẩm
Lô
Tuyên bố về sự phù hợp của EC
96 xét nghiệm
Tham khảo hướng dẫn sử dụng
Hạn sử dụng
Bảo quản ở 2-8°C (35-46°F)
Nhà sản xuất
Chuẩn ngưỡng
Chứng dương

Chứng âm
Chuẩn
Thu hồi
Liên hợp
Khay vi giếng phủ sẳn
Đệm rửa
Đệm nền
Dung dịch dừng
Đệm mẫu