Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của lợn mắc hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (PRRS), sử dụng kỹ thuật hóa mô miễn dịch để phát hiện virus

Bộ giáo dục và đào tạo
tr-ờng đại học nông nghiệp hà nội



tiêu quang an


nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lí của lợn mắc
hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (prrs),
Sử dụng kỹ thuật hóa mô miễn dịch để Phát HIệN VIRUS





Luận án tiến sỹ nông nghiệp





hà nội - 2012
Bộ giáo dục và đào tạo
tr-ờng đại học nông nghiệp hà nội


tiêu quang an

nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lí của lợn mắc
hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (prrs),

Sử dụng kỹ thuật hóa mô miễn dịch để Phát HIệN VIRUS


Chuyên ngành : Bệnh lí học và chữa bệnh vật nuôi
Mã số : 62.62.50.01


Luận án tiến sỹ nông nghiệp

Ng-ời h-ớng dẫn khoa học
1. GS.TS. đậu Ngọc Hào
2. Pgs. ts. nguyễn hữu nam


hà nội - 2012







H.
Tá


Tiêu Quang An

Lời Cảm Ơn
Tôi xin cảm ơn Ban Giám hiệu, Viện ào tạo Sau ại học, Khoa Thú Y
tr-ờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội đã tạo cho tôi những điều kiện thuận lợi
nhất để tôi hoàn thành ch-ơng trình học tập và nghiên cứu của mình.
Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể các thầy, cô giáo ở bộ môn Bệnh lý
Khoa Thú Y Tr-ờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội, những ng-ời đã tận tình
giúp đỡ tôi thực hiện thành công từng thí nghiệm của đề tài nghiên cứu.
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến GS.TS. Đậu Ngọc Hào là thầy
h-ớng dẫn và luôn định h-ớng giúp tôi thực hiện đề tài một cách khoa học và
chặt chẽ nhất.
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS. Nguyễn Hữu Nam là
thầy h-ớng dẫn trực tiếp, luôn tận tụy giúp tôi thực hiện từng b-ớc nhỏ nhất từ
khi bắt đầu, đến lúc hoàn thành đề tài.
Tôi xin chân thành cảm ơn TS. Nguyễn Thị Lan Bộ môn bệnh lý khoa
Thú Y đã cung cấp tài liệu và cho tôi những đóng góp quí báu trong quá trình
thực hiện đề tài.
Cuối cùng xin đ-ợc bày tỏ lòng biết ơn vô hạn đến những ng-ời thân
trong gia đình, bạn bè và đồng nghiệp luôn giúp đỡ, động viên tôi để tôi hoàn
thành luận án này.
Hà Nội, ngày 02 tháng 12 năm 2012
Tỏc gi lun ỏn


Tiêu Quang An


bp : Base pair
CMI : Cell Mediated Immunity
CPE : Cytopathogenic Effect
cs : C
DMEM : Dulbessco Modifiel Eagle Medium
DMSO : Dimethyl Sulfoxide
DTL 
EAV : Equine Ateritis Virus
EDTA : Ethidium Tetra Acetat
ELISA : Enzyme - linked immunosorbent assay
FBS : Fetal Bovin Serum
GP5 : Glycoprotein 5
HE : Haematoxilin  Eosin
HMDTB 
IFA : Indirect fluorescent antibody test
IHC : Immuno Histochemistry
IL : Interleukin
IPMA : Immunoperoxidase monolayer assay
KT 
KTTH 
LDEV : Lactate Dehydrogenase elevating virus
MDS : Mystery dissease syndrome
MOI : Multiplisity Of Infection
NK : Natural Killer
NSP : Nonstructural Protein
OIE : Office International des Epizooties
ORFs : Open Reading Frame
PAM : Porcine Alveolar Macrophage
PBS : Photphat Buffer Salin

PCR : Polymerase Chain Reaction
PRRS : Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome
PRRSV : Porcine Reproductive and Respiratory and Syndrome
Virus
RT-PCR : Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction
sGOT : Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase
sGPT : Serum Glutamic Pyruvic Transaminase
SHF : Simian Hemorrhagic Fever Virus
SIRS : Swine Infertiliti and Respiratory Syndrome
SN : Serum Neutralize
SRRS : Swine Respiratory Reproductive Syndrome
TCID
50
: 50% Tissue Culture Infective Dose
TNF- : Tumor Necrosis Factor - alpha

 1
:  5

 5
 5
1 5
 8
 11
 12
 13
 13
 13
 14
 14

 16
 16
 17
 17
 18
 19
 20
 21
 21
 22
 26
 26
 26
 30
 30
 30
 Nam. 32

 34
2.3.1. Các nghií  34
 35
 38
: 
 40
 40
 40
 40
í   40
 41


PRRSV 41
 41
 41
 41
 42
 42
 42
 42
 43
-145 43
-PCR 44
 46
 49
 51
 51
 51
ng 3:  53

 53

-2010. 53
3.1.
 57
3.1.3. 
 64
 
 67
 67
 69
 73

3.2.4.  . 74
 77
í 
 84
 98
3.3
 106
 106
 109
 112
 113

 115
-PCR 116

-145 117
 120

 124

--145. 125
:  127



 So sánh   7
 -2010) 19
 - PCR 45
 - PCR 46
  

-2010. 54
            
2007   55
 
 57
 u 59
 
 61
 
 65
  67
 K 70
  73
 
 74
  77
 79
    
PRRS 85
14. APP  . 86
            
P. multocida  87
             St. suis
 88
 Actinobacillus Pleuropneumoniae (APP). 89
 
 90
  91
  92
             

 93
 
 95
            
 98
3.24. 
 102
  103
  106
  109
  111
  113
  114
-145 118
             
 121
             
 124
           
 126
ÌNH
Hình 1.1. 

và cs, (2006) 6
Hình 1.2. Virus PRRS 9
Hình 1.3.  9
Hình 1.4. RS 10
Hình 1.5.  15
Hình 1.6. í 15


2007   56
Hình 3.2. 
 58
Hình 3.3. 
 59
Hình 3.4.  60
Hình 3.5. 
 62
Hình 3.6. 
 63
Hình 3.7. 
 66
Hình 3.8.  72
Hình 3.9.  72
Hình 3.10.  72
Hình 3.11.  72
Hình 3.12.  72
Hình 3.13.  72
Hình 3.14.  76
Hình 3.15.  76
Hình 3.16.  76
Hình 3.17.  76
Hình 3.18.  76
Hình 3.19.  76
Hình. 3.20.  80
 80
Hình 3.22.  80
 81
 81
 82

 83
Hình 3.27.  84
Hình 3.28.  84
Hình 3.29.   . 97
Hình 3.30.  97
Hình 3.31.  97
Hình 2.32.  97
Hình 3.33.  97
Hình 3.34.  97
Hình 3.35.  104
Hình 3.36.  104
Hình 3.37.  104
Hình 3.38.   104
Hình 3.39.  104
Hình 3.40.   104
Hình 3.41.  105
Hình 3.42.   105
Hình 3.43.  105
Hình 3.44.  105
Hình 3.45.   105
 105
Hình 3.47.  112
Hình 3.48. -PCR 116
Hình 3.49. -) 119
Hình 3.50.  119
Hình 3.51.  119
Hình 3.52.  119
Hình 3.53.  119
Hình 3.54.  119
Hình 3.55.  123

Hình 3.56.  123
Hình 3.57.  123
Hình 3.58.  123
Hình 3.59. V 123
Hình 3.60.  123

1

         (Porcine Reproductive and
Respiratory Syndrome  PRRS)


    C  
  
(Mystery swine disease) Mystery disease syndrome
Swine Respiratory Reproductive
Syndrome (SRRS), hay là Swine Infertiliti and Respiratory Syndrome
(SIRS),.           
Parvovirus

 
 (Neumann và cs, 
hâu
 (Albina và cs,
1994)    Trung


Lelystad 

Tên PRRS        


  .
            
, 
, 


2

 (Han và cs, 2006)
.
 


và



.
là



 
 
  ã có      

h PRRS. Tuy nhiên 
lâm sàng,  và
 




             
   



3
* 
    
 lâm sàng, lí  s
 ch 




+ Áp háp  (Immunohistochemistry -
IHC
* 
+   

 

+ Á 
  có
    
.
+ 
c.

+ 
 .
+    
.

4
* I:
+ 


+ 

+ 
 .

5
ng 1







Arteriviridae 
Equine Ateritis 
     Ateriviridae       Coronaviridae,

NidoviralesAteriviridae Aterivirus bao
Equine Ateritis Virus y

Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome
Virus (PRRSV) 
Aterivirus còn có hai thành
   Lactate Dehydrogenase elevating virus (LDEV)   
Simian Hemorrhagic Fever Virus (SHFV) 
k Cavanagh, 1997).







6

Hình 1.1. 
theo Gorbalenya và cs, (2006)

làm 2 nhóm.
 
Lelystad-LV).
 
VR-2332.
             c
ribonucleotide (Han và cs, 
 Ngoài ra  còn cho
d
 
  ribonucleotide
  và  2007). Ngoài ra

Châu Âu.
g  
  gây 
 .

7
 



Phả hệ di truyền của một số chủng PRRSV gây bệnh ở Việt Nam
năm 2007 và 2008, dựa trên kết quả giải trình tự gen NSP2.
(Nguồn Ken Inui, 2007).
08548-LC
08143-ND
08254-TH
08409-TB
08340-NB
08659-VL
Vinh 7B
08663-PT
07196-BG
07768-KH
07619-QNg
07643-QT
Tphuong p75
07142-BN
07172-SL
Viet nam
HUN4

07544-HP
07207-QNh
Viet nam
Viet nam
07264-TB
JXA1
HEB1
JXwn06
Viet nam
07430-HTy
08626-HNm
07213-HNo
Viet nam
HUB1
HUB2
JX0612
MN184A
MN 184C
VR2332
2008
2007
NSP2 Phylogeny


8
So sánh  


gen


UTR

mã
hoá
ORF
1a
ORF
1b
ORF
2
ORF
3
ORF
4
ORF
5
ORF
6
ORF
7

UTR
Lelystad
(M96262)
(Hà Lan)
15111
221
14763
7191
4392

750
798
552
606
522
387
127
VR2332
(AY150564)

15451
190
15071
7512
4374
771
765
537
603
525
372
190
GD*
(EU109503)

15353
189
14981
7422
4383

771
765
537
603
525
372
183

base pair)
n)



  là 15071 bp (Nielsen và
cs, 


15353 bp, trong  
(Tian và cs, 2007).
ribonucleotid trên gen khác nhau

 

1.1.2. 

-80nm, nhân nucleocapsid  25-



9

Hình 1.2. Virus PRRS
(http://www. Pigprogress.net/news/modified-prrs-virus-cause-of-
outbreak-in-China-1408,html)
PRRSV  


1994). 
          

trúc (Nonstructural Protein- NSP) NSP1- NSP12. Các ORFs còn 
          


Hình 1.3. virus PRRS
(http://www. Pigprogress.net/news/modified-prrs-virus-cause-of-
outbreak-in-China-1408,html)

10




Hình 1.4. virus PRRS
www. porcilis- prrs.com/mycrobiology-prrsv-structure.asp)