Trình bày phương pháp xác định tổng hàm lượng đường trong mẫu thực vật

Đề tài: Trình bày phương pháp xác định tổng hàm
lượng đường trong mẫu thực vật


Định lượng đường tổng số hòa tan
bằng phương pháp Dubois (1956)
Nguyên tắc của phương pháp này là dùng axit sunfuric đậm
đặc phá vỡ mọi polysacarit, oligosacarit và disacarit thành
monosacarit. Pentoses (hợp chất 5 carbon) sau đó được khử
nước thành furfural và hexoses (hợp chất 6 carbon) thành
hydroxymethyl furfural. Các hợp chất này sau đó phản ứng
với phenol để tạo ra màu vàng.


Các yếu tố ảnh hưởng đến độ chính xác của
phản ứng định lượng này:
 Độ sạch của dụng cụ
 Độ tinh khiết của hóa chất
 Sự ổn định của nhiệt độ mơi trường trong q trình phản ứng
diễn ra.


Hố chất và dụng cụ làm thí
nghiệm
Hố chất
Dụng cụ
Ngun liệu: Trái cây giàu
đường
Cồn 960
Phenol
H2SO4 đđ

Quang phổ kế

H2SO4 60%

Erlen 100ml

Saccharose 0,1%
Glucose 0,2mg/ml

Cối chày sứ
Phễu thủy tinh
Pipette 1ml
Pipette 5ml
Nồi cách thủy

Ống nghiệm
Bình định mức 250ml
Bình định mức


Quy trình thực hiện:
• Pha dung dịch đường mẫu:

0.5g Saccharose 0,1%

Sấy khơ ở 60°C

hịa tan trong 500ml
nước cất.

Chuẩn bị mẫu thí nghiệm:
Nghiền 1-2g nguyên liệu cho vào Erlen 100ml

Thêm vào 100 ml cồn 960

Đun sôi cách thủy (đun sôi ba lần).

Khuấy, để nguội, lọc qua giấy lọc. Cho phần được lọc vào
erlen 100ml.


Cho thêm vào phần bã 10ml cồn 960
Đun sôi cách thủy (đun 2 lần).

Khuấy, để nguội, lọc qua giấy lọc.

đưa bã lên phễu lọc và dùng cồn 960 để rửa sạch bã

Cho phần được lọc vào erlen 100ml.


■Cho phần nước thu được bay hơi hết cồn trên nồi đun
cách thủy nhẹ.
■Pha loãng mẫu trên thành 50 lần (dùng bình định mức).
Nếu mẫu có độ đường cao thì có thể pha lỗng thành
100- 250 lần.
+ Xây dựng đồ thị mẫu chuẩn – đo saccharose:

 Bảng chuẩn bị mẫu thí nghiệm
BĐM (số ml Saccharose 0,1%)

1

2

3

4

5

6

7

ống nghiệm (số ml dd từ BĐM)

1

1

1

1

1

1

1

Lượng Saccharose tương ứng (µg) 10

20 30 40 50 60 70

Cho vào từng ống 1ml dd phenol 1% và 5ml dd H2SO4, để 10 phút, lắc
đều. Đun trên nồi cách thủy 20 phút ở 25- 300C. Màu phản ứng xuất
hiện, đem đo OD ở bước sóng 490 nm.

Cường độ màu (E)

 

 

 

 

 

 

 


+ Đo mẫu thử:

Hút 1ml dd đường từ nguyên liệu được
pha loãng cho vào từng ống nghiệm.
Cho thêm phenol 1% và 5ml H2SO4
dung dịch vào mỗi ống nghiệm. Để 10
phút, lắc đều. Giữ trên nồi cách thủy
chừng 20 phút ở 25 – 300C. Màu xuất
hiện, đo màu ở bước sóng 490 nm.


+ Làm đồng thời như trên với mẫu trắng (1ml nước cất). Chú
ý các mẫu chuẩn, mẫu thử và mẫu trắng nên làm cùng đồng
thời với nhau.
• Tính kết quả:
Vẽ các đồ thị chuẩn giữa nồng độ hấp thu A và nồng độ C.
Sau đó xác định chỉ số đường của mẫu đo được bằng cách
dóng trên đồ thị. Trị số này chính là lượng đường thật sự có
trong mẫu nguyên liệu lúc đầu bằng cách nhân với hệ số pha
loãng K.


TÀI LIỆU THAM KHẢO
• A method for routine measurements of total sugar and starch
content in woody plant tissues. PAK S. CHOW and SIMON M.
LANDHÄUSSER, December 15, 2003; accepted February 15,
2004; published online August 2, 2004
• Dubois,M, Gilles, KA, Hamilton, JK, Rebers, PA and Smith, F
(1956) Anal Chem 26 350.
• Tài liệu thực hành hóa sinh 1.