KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 3 pdf

24
SỬ DỤNG CÁC ENZYME THÔNG
DỤNG TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ
1. ENZYME GIỚI HẠN (RESTRICTION ENZYME)
2. POLYMERASE (DNA, RNA)
3. NUCLEASE (DNase, RNase)
4. LIGASE
25
MOÄT SOÁ ENZYME GIÔÙI HAÏN (RE)
26
MOÄT SOÁ ENZYME GIÔÙI HAÏN (RE)
27
CÁC ENDO- & EXONUCLEASE
Loại enzyme Cơ chất Vò trí nhận biết và cắt trên DNA, RNA
28
LẬP BA
Û
N
Đ
Ồ CẮ
T
GI
Ơ
Ù
I
HẠN (RESTRICTION MAP)
Trình tự DNA cần nghiên cứu được cắt
với nhiều RE, theo các tổ hợp cắt đơn,
cắt phối hợp. Các sản phẩm cắt sau đó
được phân tích bằng điện di và xử lý với
các phần mềm vi tính để xây dựng bản

đồ cắt giới hạn.
29
KỸ THUẬT DNASE I
FOOTPRINTING : XÁC ĐỊNH
TRÌNH TỰ CIS TRÊN DNA
Một đọan DNA được đánh dấu phóng xạ
ở một đầu 5’ và được ủ chung với các
phân đoạn protein được xem là có tương
tác với DNA này. Sau đó, tổ hợp được
mang phân cắt bằng enzyme Dnase I.
Nơi nào trên DNA có gắn protein, nơi đó
sẽ được bảo vệ khỏi sự phân cắt này, và
hình thành “dấu chân” (giếng 9-12 và O
trên hình). Đó chính là trình tự CIS. Kích
thước của trình tự có thể được nhận biết
khi so sánh với thang DNA (M trên hình)
30
CÂU HỎI – PHẦN 3
1. Cách xây dựng bản đồ cắt hạn chế (restriction map)
2. Cách tiến hành phương pháp DNase Footprinting, ứng dụng của phương pháp
3. Ứng dụng của các nuclease : Nuclease S1, DNase I, RNase A, RNase H,
4. Ứng dụng của các polymerase : reverse transcriptase, DNA polymerase, SP6 RNA
polymerase,
Taq
polymerase, DNA polymerase I, Terminal transferase
5. Ứng dụng của T4 polynucleotide kinase, của alkaline phosphatase