tóm tắt luận án tiến sĩ nghiên cứu một số đặc tính sinh học của virus cúm ah5n1 clade 7 phân lập ở việt nam

B GIÁO DO
I HC NÔNG NGHIP HÀ NI





NGUYN TÙNG



VIRUS CÚM A/H5N1 CLADE 7 




: 62.64.01.04


TÓM TT LUN ÁN TIN S






HÀ N 2013


c hoàn thành ti:















:
- 
- 


1



Bnh cúm gia cm xy ra lu tiên  Vit Nam và cu
c ghi nhc lc cao (HPAI). K t n
nay Dch cúm gia cm H5N1 vn liên tc xy ra  Vit Nam tuy nhiên quy mô d
i tr nên nh và l t c trong khu vc
t Bn, Hàn quc, Trung quch cúm gia
c. Vic khng ch dch cúm gia cc tin hành mt cách mnh

mm thiu nhng thit h nh
bnh tái phát vn luôn tn ti.
c lc cao không nhng nguy him cho gia cm mà còn rt
nguy hii vi. T n nay, th gin Virus
cúm gia ci  c, vi 602 ca b
cht. (WHO,2012). c tính bin i r
có nhic phát hin và phân lp  nhic khác nhau t
châu Á sang châu Âu.
 n và phân lp
c mt chng virus A/H5N1 mi thuc clade 7 t gà nhp lu  biên gi
/H5N1 mi ch c phát hin  gà Trung quc và tc
phát hin xut vacxin (Re-4) t chng virus
A/H5N1 thu dng phòng bnh  mt s  
[42]. Vi thc t có rt nhiu gà nhp lu vào Vit nam qua biên gii cho thy nguy
 xâm nhp và nhim ca Vit Nam và có 
i vi c i.
Vì vy cn phi tin hành nghiên cu v c tính sinh hc c
i vng gia cm khác nhau, kh o h ca vacxin
hii v
.
c thc t trên chúng tôi ti tài: c tính
sinh hc c  /H5N1 clade 7 phân lp  Vi  nhm góp phn
cung cp t cho vic xây dng bin pháp phòng chng bnh cúm gia
cm.
 Mc tiêu c tài
-               

- 

 c c tài

làu tiên  Vit Nam có h thng v c tính
sinh hc ca virus cúm A/H5N1 clade 7.
-  tham kho cho vic nghiên cu v s bii virus cúm gia cm,
c bii vi ngành thú y.
2

- 

 thc tin c tài
- 
.
- 

.
- Khuyn cáo cho vic s dng vacxin cúm phù hp vi virus m 
trong thc t.
- 
.
 Nhgóp mi c tài
-           

.
- t và phân tích 
--/H5N1 clade 7.
- c kh o h ca vacxin H5N1 Re-1 v/H5N1
clade 7 ti Vit Nam.


1.1. Nguyên nhân ca bnh cúm gia cm
Cúm gia cm (Avian Influenza-AI) là mt bnh truyn nhim cp tính ca gia

cm, do nhóm virus cúm type A, thuc h   
 rc phân chia thành nhiu subtype khác nhau da trên
hai kháng nguyên b mt capsid ca ht virus là HA và NA. Nhóm virus cúm A có 16
subtype HA (t  n H16) và 9 subtype NA (t  n N9). S t hp
(reassortment) gia các subtype HA và NA, v mt lý thuyt, s to ra nhiu subtype
khác nhau. Mt khác, c tính quan trng là d t bin trong
gen/h c bit  gen NA và HA), hoi các gen kháng nguyên vi nhau,
trong quá trình xâm nhim và tn ti lây truyn gia các loài vt ch
.
H   c phát hin bao g     
virus cúm A (Influenza A); nhóm virus cúm B (Influenza B); nhóm virus cúm C
(Influenza C); và nhóm Thogotovirus. Các nhóm virus khác nhau bi các kháng
nguyên b mt capsid,  virus cúm A và B là Hemagglutinin (HA),  virus cúm C là
Hemagglutinin Esterase Fusion (HEF), và  Thogotovirus là Glycoprotein.
1.2. Kháng nguyên ca virus cúm gia cm
nh subtype d s kháng nguyên (protein)
b mt là HA (Hemagglutinin-vit tt là H) và NA(Neuraminidase-vit tt là N) có vai
3

trò quan trng trong min dch bo hc coi là yu t va quyt
nh tính kháng nguyên, va quyc lc ca virus cúm A.
1.2.1. Protein HA (Hemagglutinin)
Protein hemagglutinin là mt glycoprotein thuc protein màng type I (lectin), có
kh t hng cu gà trong ng nghim (in vitro), kháng th c hiu
vi HA có th phong ta s c gi là kháng th  t
hng cu (HI- c phát
hin (H1 - H16), ba subtype (H1, H2 và H3) thích ng lây nhim gây bnh  i
i dch cúm trong lch s. Có khong 400 phân t HA trên b mt
capsid ca mt virus, có vai trò quan trng trong quá trình nhn din virus và khi
ng quá trình xâm nhim ca virus vào t bào ch.

1.2.2. Protein NA (Neuraminidase)
Protein neurominidase còn gi là sialidase là mt protein enzyme có bn cht là
glycopc gn trên b mt capsid ca virus cúm A, mang tính kháng nguyên
ng subtype NA. Có 9 subtype (t c phát hin ch yu
 virus cúm gia cc tìm thy  i liên quan
i dch cúm trong lch s. Protein NA có vai trò là mt enzyme ct liên
kt gia gc sialic acid ca màng t bào nhim vi phân t cacbonhydrate ca protein
HA, gii phóng ht virus ra khi màng t bào nhiy nhanh s lây nhim ca
 vt chn s tp hp ca các ht virus mi trên màng t
bào. Mt khác, NA tham gia vào phân ct liên k
y nhanh quá trình c  i phóng h gen ca virus vào trong bào
 bào nhim, giúp cho quá trình nhân lên ca virus di
1.2.3. c lc và kh nh ca virus cúm gia cm
Kh m virus ph thung ca men protease ca vt ch
n s phá v các liên kt hoá hc sau khi dch mã ca phân t liên kt. Các enzym
gi  liên kt khi ch có mt phân t arginin, trong
i cn nhin, vì th c lc
c     gây nhim cho gia c       sp xp các
aminnoaxit ca virus. C th n vic gii trình t 
a gen HA mà s có mt ca các axit amin 
cho phép d c lc cao hay không.
Trong thc t i ta chia virus cúm ra làm 2 loi: Loc lc thp
(LPAI) và loc lc cao (HPAI).
- LPAI là loi virus khi phát tri nhim, có th gây bnh cúm nh
không có triu chn hình và không làm cht vt ch.
- HPAI là loi virus cúm A có kh i tng
 nhim, trên gia cng gây cht 100% s gia cm b nhim
trong vòng 48-72 gi sau nhim. Các v dch lng là
virus có kháng nguyên H5 và H7.

4


NI DUNG - NGUYÊN LIU - U
2.1. Ni dung
2.1.1. Phân lnh virus cúm gia c

-           -PCR
(RRT-PCR)
- Phân lp virus trên phôi trng gà 9-10 ngày tu
/H5N1.
- ng phn ng HA, HI và RRT-PCR.
c tính di truyn hc c/H5N1 clade 7
Mi quan h v di truyn ca virus A/H5N1 clade 7 vi các virus A/H5N1
khác thông qua phân tích h ph c.
nh mt s c tính sinh hc ca virus A/H5N1 clade 7
- Tính thích ng trên phôi gà, trên t 
-   c lc ca vir /H5N1 clade 7 trên mt s   
(gà, vt và ngan).
- Mt s m b.
ng kháng nguyên)
- Mi quan h v kháng nguyên hc ca virus A/H5N1 clade 7 vi các virus
A/H5N1 khác thông qua HI chéo vi mt st s
clade khác.
nh hiu lc ca vacxin H5N1 Re-1
- Hiu qu ca vacxin cúm gia cm Re-1  Vii vi virus cúm gia cm
A.
2.2. 
-

--.
-
2.3. Vt li pháp nghiên cu
2.3.1. Vt liu nghiên cu:
- Dch swab (ngoáy  nhp) t gà nhp lu; /H5N1 phân lp t dch
swab; Phôi trng gà 9-10 ngày tui, t  t phôi gà 9-10 ngày tui;
Gia cm (gà, vtháng th cúm gia cm.
- /H5N1 Re-1; Kháng nguyên và kháng th chun cúm
gia cm H5N1; Kít chit tách Qiagen Rneasy minikit và Kít realtime RT-PCR
Invitrogen superscriptIII;       gii trình t
gen
u:

              
   
c.

5

p virus trên phôi trng gà
Bnh phm dch ngoáy  nhc x lý, và phân lp trên xoang
niu mô phôi trng gà ngày tui; kim tra bng phn 
nh kh  t hng cu gà và phn ng HI vi kháng th chun
cúm gia c nh virus phân lc.

50

Virus     m
   .           nh phôi
virus A/H5N1 và 

50
ca virus.

50

Virusm lên t 
phôi gà. Quan sát CPE  nh svirus A/H5N1 và TCID
50
ca virus.
2.3.2.5ng vt thí nghim (gà, vt và ngan):
Gây nhim bng cách nhpha loãng 1/10
 10
-6
TCID50. 
a OIE).
2.3.2.6
/H5N1 clade 7
Chúng tôi s d, HI c nh virus phân lc.
2.3.2.7ng realtime RT-PCR (RRT-PCR)
- Chit tách RNA c/H5N1bng kít Qiagen Rneasy minikit.
- Chy phn ng RRT-PCR phát hin virus cúm
2.3.2.8. n xét nghim bnh tích vi th
Các mu ph tng c x t lát bng microtome và nhum HE
 quan sát các bii bnh lý bng kính hin vi.
2.3.2.9i trình t gen:
Sn phm  c gii trình t bng máy sequence t ng ABI 3730; S
dng phn m thc hin vic so sánh chui trình t (Alignment);
Lp h ph gen HA, NA và M d-joining (NJ) vi phn
mm MEGA so sánh v/H5N1thuc các clade (nhánh) khác nhau
vi gc là virus clade 0 (A/goose/Guangdong/1/1996).

2.3.2.10. Tiêm phòng vacxin s gây bnh lâm sàng.
c tiêm phòng vacxin cúm A/H5N1 Re-c th c
bng virus /H5N1clade 7 là 10
6
TCID
50
ng nh 
. Theo dõi các biu hin lâm
 s gây bnh lâm nh
t l bo h.

6


KT QU VÀ THO LUN
3.1. Phân lp và nh virus cúm A/H5N1 clade 7
Tng cng 495 mu swab ngoáy  nhp t gà
nhp l c thu thp và g n Trung tâm Ch      xét
nghi
n thy 17 mu bnh ph
vt t
l trung bình 3,43% (17/495).
Xét nghim các mtính virus cúm A b-
PCR phát hin 15/17 mt t l trung bình 3,03%. Các
mc phát hin  c 2 huyn Cao Lc và Lc
Bình. Tip tc phân lp trên phôi trng, chúng 
A/H5N1.
Bng 3.1. Kt qu xét nghim và phân lp virus t
 biên gi)





(RRT-PCR)
5N1
(RRT-PCR)


%

%

%

275
10
3,64
8
2,91
5
1,82

220
7
3,18
7
3,18
0
0,00


495
17
3,43
15
3,03
5
1,01
c tính di truyn c
i trình t và lp cây phát sinh loài.
3.2.1. Gii trình t gen HA/H5 và phân tích cây phát sinh loài (phylogeny) da
trên chui nucleotide gen H5.
Tên ca các m/H5N1và tên ca các mu RNA
t theo danh pháp quc t: Tên
c/Tên vit tt Trung tâm Chng
ting Anh-ký hiu ca virus hoc m các mp và phát
hic trình bày  bng 3.2.
Vic tìm kim s ng ca các virus cúm trên ngân hàng d liu bng gen
HA cho thy các m ng rt cao vi hai chc
mô t   thuc clade 7 là virus A/chicken/Hebei/326/2005/H5N1 và virus
   ng trung bình ca gen HA  m 
nuleotide l
.

7

B

S
TT
Tên chng virus cúm phân lc

m
phát hin
Phân loai
clade/nhóm
Subtype
1
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008
Cao Lc
7
H5N1
2
A/chicken/Vietnam/NCVD-03/2008
Cao Lc
7/Nhóm B
H5N1
3
A/chicken/Vietnam/NCVD-04/2008
Cao Lc
7/Nhóm B
H5N1
4
A/chicken/Vietnam/NCVD-05/2008
Cao Lc
7/Nhóm B
H5N1
5
A/chicken/Vietnam/NCVD-093/2008
Cao Lc
7/Nhóm A
H5N1

Tên mng tính virus cúm (không
phân lc virus)



6
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab06/2008
Cao Lc
7/Nhóm B
H5N1
7
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab15/2008
Lc Bình
7/Nhóm A
H5N1
8
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab16/2008
Lc Bình
7/Nhóm B
H5N1
9
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab17/2008
Lc Bình
7/Nhóm A
H5N1
10
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab18/2008
Lc Bình
7/Nhóm A

H5N1
11
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab19/2008
Cao Lc
7
H5N1
12
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab20/2008
Cao Lc
7/Nhóm B
H5N1
13
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab24/2008
Lc Bình
7/Nhóm B
H5N1
14
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab25/2008
Lc Bình
7/Nhóm B
H5N1
15
A/chicken/Vietnam/NCVD-swab26/2008
Lc Bình
7/Nhóm B
H5N1

13 trong s 15 m
nh rõ r(xem hình 3.2.), tc g
.

Các gen HA ca 2 nhóm virus A hoc B hin th s khác bit trong cùng nhóm 
 i vi chui axit amin, c th s khác bit
trung bình tng th v nucleotide là 0,39% và v c li, s
khác nhau git trung bình 4,05% và 5,69% lt  các
m nucleotide và amino acid trên khp vùng gen HA mã hóa.
a nhóm A hoc B khác bit v chui nucleotide hoc axit
amin khác bit gi
c  axit amin trên gen HA (Bng 3.4). Mc
 khác bii s thay th a các chui protein
HA  hai nhóm.

8


Hình 3.2.  chui nucleotide gen H5 c
/H5N1 clade 7 ( phân tích Neighbor-joining s dng phn
mm MEGA 5, giá tr boostrap 1000)
Ngoài ra, s khác bit trung bình ca tt c i trình t
trong nghiên cu này so vi t tiên gn nht v gen HA là A/chicken/Shanxi/2/2006 là
3,8% (3,3-3,9%)  m     -      
(Bng 3.4). Tóm li, nhng d liu này cho thy virus A/chicken/Shanxi/2/2006 là t
tiên gn nht cnh trong nghiên cu này.
9

B khác bit v di truy

Ký

Virus 
1

2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Axit amin (%)
1
A/goose/Guangdong/1/1996 (0)

3.9
3.8
4.3
4.3
4.5
3.6
6.5
8.4
9.1
9
8.8
9
2
A/goose/Guiyang/337/2006 (4)

4

4.8
5.6
6.1
5.9
4.3
7
8.2
9
8.2
8.1
8.4
3
A/Viet Nam/1203/2004 (1)
3.5
4.5

3.2
3.4
3.4
4.7
7.2
9
9.7
9.3
9.1
9.3
4
A/Indonesia/5/2005 (2.1.3)

4.4
5.4
3.7

3.6
3.2
4.5
7
8.4
9.5
8.8
8.6
9
5
A/bar-headed goose/Qinghai/1/2005 (2.2)
4.3
5.4
3.5
3.5

3.1
5
7.9
8.6
9.1
9.1
9
9.1
6
A/Anhui/1/2005 (2.3.4)

4
5.3
3.3
3.4
3.1

4.5
7.2
9
9.1
9.1
9
9.1
7
A/Beijing/01/2003 (7)
3.1
4
3.7
4.6
4.4
4.1

5
7
7.9
7.2
7
7.4
8
A/chicken/Shanxi/2/2006 (7)

4.6
5.7
5.3
6
6.2
5.6
3.3

5.4
5.9
5.9
5.7
6.1
9
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008 (7, Vietnam)
6.2
6.5
6.6
7.1
6.9
6.8
4.4
3.3

6.1
3.2
3.1
3.4
10
A/chicken/Vietnam/NCVD-093/2008 (7, Vietnam, nhóm A)

6.3
6.7
6.8
7.3
7.1
6.9
4.7
3.6
4

5.7
5.6
5.9
11
A/chicken/Vietnam/NCVD-04/2008 (7, Vietnam, nhóm B)
6.8
6.8
7
7.5
7.3
7
4.7
3.9
2.8
4.1

0.2
0.5
12
A/chicken/Vietnam/NCVD-05/2008 (7, Vietnam, nhóm B)

6.7
6.7
6.9
7.5
7.2
7
4.7
3.9
2.8
4.1
0.1

0.4
13
A/chicken/Vietnam/NCVD-03/2008 (7, Vietnam, nhóm B)
6.6
6.6
6.9
7.4
7.2
6.9
4.6
3.8
2.7
4
0.4
0.3

Nucleotide (%)
-7 Viu b xóa mt mt
alanine  v trí 253 và chèn thêm 3 axit amin c gch chân) vào v trí poly basic
gn cleavage site, to ra mt chui polybasic  v trí cleavage site n 
PQREREGGRRRKR*GLF.
- Các virus A/H5N1 nhóm A ca clade 7 vn duy trì chui trình t axit amin
 
  là virus A/chicken/ Vietnam/NCVD-      tiên
(ng) ca ct chui poly basic trung
gian mang ma nhóm B (PQREGGRRRKR*G).
- M      a 2 nhóm A và B là
A/chicken/Vietnam/NCVD-  ó chui trình t trung gian vi
alanine b        t axit amin (glycine) gn v trí
cleavage site to nên chui trình t polybasic PQIEGGRRRKR*G gi
3.2.2. Gii trình t gen NAN1 và phân tích cây phát sinh loài da trên chuôi
nucleotide gen N1
Chúng tôi tin hành lp cây phát sinh loài ca gen N1 da trên chui nucleotide
và kt qu c biu din  hình 3.4.
Kt qu phân tích phát sinh loài dng nhi vi kt qu
so sánh da trên g
 i vi gen N1 c
clade 7 ca Trung Quc và cm vi nhau trên cây phát sinh loài. Các ch
A/H5N1clade 7 ca Vit Nam b20 axit amin  v trí t
49-68 trên vùng thân c.
Trong 5 ch        t Nam có 4 chng là
A/chicken/Vietnam/NCVD-03/2008, A/chicken/Vietnam/NCVD-04/2008,
10

A/chicken/Vietnam/NCVD-05/2008 và A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008 cm
ng A/chicken/Vietnam/NCVD-093 li nm tách khá xa

khi nhóm này và có m ng gn vi ch7 ca Trung
Quc phân lp t (A/Beijing/01/2003).

Hình 3.4. Cây phát sinh loài da trên chui nucleotide
virus A/H5N1 clade 7 (PNeighbor-joining s dng phn
mm MEGA 5, giá tr boostrap 1000)
Gia các chg có s tii vi
gen N1, c th là chng A/chicken/Vietnam/NCVD-093 khác bit vi nhóm còn li
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-05/2008
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-04/2008
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-03/2008
A/chicken/Shanxi/10/2006
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-016/2008
A/chicken/Hebei/706/2005
A/chicken/Liaoning/A-1/2007
A/mallard/Huadong/hn/2005
A/chicken/Shanxi/2/2006
A/chicken/Ningxia/24/2006
A/chicken/Hebei/126/2005
A/chicken/Hebei/102/2005
A/chicken/Hebei/326/2005
A/Beijing/01/2003 2003
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-093/2008
A/Viet Nam/1194/2004
A/Viet Nam/1203/2004
A/chicken/Vietnam/8/2003
A/chicken/Viet Nam/AG-010/2004
A/Vietnam/CL20/2004
A/chicken/Viet Nam/DT-015/2004
A/chicken/Bac Lieu/07-10/2007

A/Muscovy duck/Ca Mau/07-04/2007
A/duck/Viet Nam/38ST/2008
A/duck/Hue/V6/2010
A/duck/Viet Nam/TMU026/2009
A/chicken/Viet Nam/TMU025/2009
A/duck/Hai Phong /208/2006
A/chicken/Bac Giang/07-74/2007
A/duck/Ha Tinh/07-53/2007
A/chicken/Ha Nam/07-83/2007
A/duck/Vietnam/8/05
A/goose/Vietnam/3/05
A/duck/Vietnam/1/2005
A/Hong Kong/485/1997
A/chicken/China/27402/1997
A/HongKong/486/97
A/HongKong/481/97
A/Hong Kong/156/97
A/duck/Guangxi/2291/2004
A/duck/Guangxi/1378/2004
A/chicken/Viet Nam/Ncvd8/2003
A/Hong Kong/213/2003
A/HK/212/03 2003
A/goose/Viet Nam/113/2001
A/Pheasant/HongKong/FY155/01
A/goose/Hong Kong/437-6/1999
A/Goose/Guangdong/3/97
A/Chicken/HongKong/YU822.2/01
A/Goose/Guangdong/1/96
40
72

52
99
95
51
100
81
100
55
100
100
98
100
95
100
83
50
70
61
46
100
85
97
92
68
79
73
89
99
99
97

95
98
71
91
89
90
69
99
65
49
86
99
54
0.005
Virus clade 7 HA
20 axit amin
19 axit amin
11

ca các virus clade 7 ca Vit Nam. Tuy nhiên, có th nhn th
/H5N1thuc clade 7 ca Trung Qut Nam  ng
cao và khác bit hoàn toàn vi các clade khác hin tc.
Vic phân tích s khác bit di truyn trên gen N1 v axit
amin ct Nam và mt s c
ca Trung Quc trình bày  bng 3.6.
So sánh cho thy s sai khác di truyn gi/H5N1 clade 7
ca Vi      -03/2008,
A/chicken/Vietnam/NCVD-04/2008, A/chicken/Viet- 
-t th m 
 m axit amin. N khác bii ln so v

khác ca Vic clade 7 là A/chicken/Vietnam/NCVD-093/2008. S
              
A/chicken/Vietnam/NCVD-093/2008 l t là 4,7±0,2% (4,5-4,9%) và 5,6±0,3%
(5,3-6,0%).
Bng 3.6. M khác bit v di truyn trên gen N1 ca 5 ch
A/H5N1 clade 7 so sánh vi mt s chng tham chiu




1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14


Axit amin (%)
1
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008

2.5
2.7
2.7
5.3
2.3
3.0
3.4
5.0
4.8
6.2
9.5
9.7
5.3
2
A/Chicken/Vietnam/NCVD-03/2008
1.9

0.7
0.4
5.5
2.0
2.5
3.6
5.8
5.5
6.2
9.7
9.9
5.3
3

A/Chicken/Vietnam/NCVD-04/2008
2.0
0.5

0.4
6.0
2.3
3.0
4.1
6.0
5.8
6.7
10.2
10.4
5.8
4
A/Chicken/Vietnam/NCVD-05/2008
2.0
0.4
0.4

5.5
2.3
2.7
3.6
6.0
5.8
6.2
10.0
10.2

5.3
5
A/Chicken/Vietnam/NCVD-093/2008
4.5
4.7
4.9
4.5

5.5
4.1
2.5
5.5
5.0
5.3
9.7
9.9
4.1
6
A/chicken/Shanxi/10/2006
1.6
1.4
1.6
1.7
4.5

2.7
3.6
5.5
5.5
6.5

10.2
10.4
5.3
7
A/chicken/Shanxi/2/2006
2.7
2.5
2.7
2.7
4.1
2.4

2.0
4.6
4.1
4.8
8.5
8.5
3.9
8
A/Beijing/01/2003
2.4
2.7
3.0
2.8
2.3
2.3
2.3

3.6

3.2
3.6
8.2
8.2
2.3
9
A/Viet_Nam/1194/2004
4.7
5.2
5.4
5.4
4.3
4.7
4.6
2.8

0.9
5.0
8.7
8.7
3.4
10
A/Viet_Nam/1203/2004
4.2
4.8
5.0
5.0
3.8
4.3
4.1

2.3
1.0

4.6
8.2
8.2
3.4
11
A/goose/Viet_Nam/113/2001
6.6
6.7
6.8
6.4
5.7
6.5
6.0
4.5
5.6
4.9

7.9
7.7
2.8
12
A/Hong_Kong/156/97
14.2
14.8
15.1
14.7
13.8

14.4
13.2
13.0
13.8
13.3
12.2

1.1
6.9
13
A/goose/Vietnam/3/05
13.0
13.4
13.7
13.3
12.3
13.0
11.9
11.4
12.3
11.7
10.9
1.8

6.9
14
A/Goose/Guangdong/1/96
5.2
5.6
5.9

5.5
4.3
5.3
5.0
3.0
3.6
3.3
3.2
11.1
9.8



Nucleotide (%)
Ch-n nht vi
ch2003 ca Trung
Quc. C th s sau khác ch là 2,3%  m nucleotide và 2,5%  m axit
amin. S sai khác ln nht có thy gi   
t Nam so v/H5N1 có hit bi
 19 axit amin (virus A/Hong_Kong/156/97 và virus A/goose/Vietnam/ 
-9,5 - 10,4%. m axit amin.
12

   i trình t gen M và lp cây phát sinh loài da trên chui
nucleotide gen M
Da trên si gen M c
p cây phát sinh loài (phylogenetic tree theo dõi s tin hóa ca các chng
virus này (Hình 3.5).

Hình 3.5. Cây phát sinh loài d/H5N1 clade 7

c lp b-joining s dng phn mm
MEGA 5, giá tr boostrap 1000)
Kt qu phân tích cho thy7
ca Vi m trong nhóm v
A/H5N1Clade 7 Trung Quc, chng t gen M c/H5N1clade 7 ca
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-04/2008
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-05/2008
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-093/2008
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-03/2008
A/CHICKEN/VIETNAM/NCVD-016/2008
A/chicken/Shanxi/10/2006 2006
A/chicken/Shandong/A-10/2006 2006
A/chicken/Shanxi/2/2006
A/Beijing/01/2003
A/chicken/Korea/es/2003
A/black-headed goose/Qinghai/1/2005
A/chicken/Bhutan/248006/2010
A/duck/India/TR-NIV4396/2008
A/duck/Hunan/1386/2003
A/Indonesia/239H/2005
A/Indonesia/CDC1046/2007
A/Indonesia/535H/2006
A/Ck/Indonesia/2A/2003 2003
A/chicken/East Java/UT6045/2007
A/duck/Guangxi/351/2004
A/chicken/Thailand/ICRC-7356/2010
A/Thailand/Kan353/2004 2004
A/duck/Vietnam/48/2004 2004
A/Cambodia/P0322095/2005
A/Vietnam/CL100/2004

A/duck/Vietnam/286/2005
A/Muscovy duck/Ca Mau/07-04/2007
A/chicken/Lang Son/200/2005 2005
A/duck/Guiyang/3834/2005 2005
A/Anhui/T2/2006 2006
A/Anhui/2/2005 2005
A/Shanghai/1/2006 2006
A/crested myna/Hong Kong/540/2006
A/Hong Kong/6841/2010
A/mallard/Korea/1195/2010
A/Hunan/1/2006
A/duck/Guangxi/150/2006
A/duck/Laos/P0117/2007
A/duck/Zhejiang/52/2000
A/goose/Fujian/bb/2003
A/goose/Vietnam/3/05 2005
A/Duck/Hong Kong/y283/1997
A/Hong Kong/156/1997
A/duck/Shantou/195/2001
A/Chicken/Hong Kong/SF219/2001
A/Goose/Guangdong/1/96
99
100
99
99
99
94
93
96
67

52
94
91
94
77
83
83
83
80
77
74
68
68
66
59
55
58
97
46
33
41
33
35
33
25
31
53
14
27
28

34
53
51
0.002
Clade 7

Clade 7

13

Vit Nam và Trung Quc có cùng ngun g th khác bit di truyn 
m nucleotide và axit amin, chúng tôi so sánh gen M c
A/H5N1clade 7 ca Vit Nam vi mt s/H5N1ca Trung Quc. Kt qu
c biu th  bng 3.8.
M sai khác v di truyn gen M gi/H5N1clade 7
ca Vi, s sai khác t m nucleotide là 1%
và m  axit amin là 0,6%. M  sai khác gi    m
A/H5N1thuc clade 7 ca Vi
rt thp. S sai khác t di truyn  m nucleotide và axit amin gia các
virus ca 2 nhóm này l t là 3,0±0.1% và 3,3±0.2% (virus
A/chicken/Shanxi/2/2006).
S 
 gen M 
 -it amin. Hai
/goose/Vietnam/3/05 và ch

 7%.M      c clade 0 là chng
c coi là thy t cc
l sai khác v di truyn vt Nam 
m nucleotide là 5,3±0.2% (5,2-5,6%) và  m axit amin là 4,2±0.2 % (4,1-

4,4%).
B khác bit v di truyn trên gen M ca 5 ch
7 so sánh vi mt s chng tham chiu



1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15


Axit amin (%)
1
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008

0.6
0.3
0.3

0.3
1.6
1.3
3.5
1.9
7.4
1.9
2.1
3.8
4.4
7.4
2
A/chicken/Vietnam/NCVD-093/2008
1.0

0.3
0.3
0.3
1.6
1.3
3.5
1.9
7.4
1.9
1.8
3.8
4.4
7.4
3
A/chicken/Vietnam/NCVD-03/2008

0.9
0.3

0.0
0.0
1.3
0.9
3.2
1.6
7.1
1.6
1.8
3.5
4.1
7.1
4
A/chicken/Vietnam/NCVD-04/2008
0.9
0.3
0.2

0.0
1.3
0.9
3.2
1.6
7.1
1.6
1.8
3.5

4.1
7.1
5
A/chicken/Vietnam/NCVD-05/2008
0.9
0.3
0.2
0.0

1.3
0.9
3.2
1.6
7.1
1.6
1.8
3.5
4.1
7.1
6
A/chicken/Shandong/A-10/2006
1.3
1.3
1.2
1.2
1.2

0.9
3.8
1.6

7.4
1.6
1.8
3.5
4.4
7.4
7
A/chicken/Shanxi/10/2006
0.8
0.9
0.8
0.8
0.8
0.8

4.1
1.6
7.4
1.6
1.8
3.5
4.4
7.4
8
A/chicken/Shanxi/2/2006
3.1
3.1
2.8
2.9
2.9

2.8
3.0

3.2
7.4
3.2
3.5
5.1
5.8
7.4
9
A/Beijing/01/2003_2003
2.4
2.4
2.3
2.3
2.3
1.7
2.1
3.5

5.8
0.0
0.7
1.9
2.8
5.8
10
A/goose/Vietnam/3/05
10.0

10.1
9.7
9.7
9.7
10.0
10.4
9.3
8.7

5.8
5.7
5.8
3.8
0.0
11
A/Anhui/2/2005
3.0
3.1
3.0
3.0
3.0
2.4
2.7
4.0
0.9
8.1

0.7
1.9
2.8

5.8
12
A/blackheadedgoose/Qinghai/1/2005
3.2
3.2
3.2
3.2
3.2
2.6
2.7
4.0
1.4
9.3
1.3

2.1
3.2
5.7
13
A/goose/Fujian/bb/2003
4.0
4.1
3.8
3.8
3.8
3.4
3.7
4.4
2.1
8.1

2.0
2.3

2.8
5.8
14
A/Goose/Guangdong/1/96
5.5
5.6
5.2
5.2
5.2
5.0
5.3
5.7
3.5
6.0
3.4
3.8
3.2

3.8
15
A/Hong_Kong/156/97
10.7
10.8
10.5
10.5
10.5
10.7

11.1
9.3
9.4
1.3
8.8
9.8
8.8
7.5



Nucleotide (%)
Tóm li, kt qu phân tích phát sinh loài, kt qu phân tích s sai khác di truyn
da trên gen H5, N1 và M c/H5N1Clade 7 ca Vit Nam
14

cho thade 7 ca Vi ng cao v
n g
.
nh mt s c tính sinh hc c
Nam (A/chicken/Vietnam/NCVD-016/2008)
3.3.1. Tính thích nh ch s EID
50
)
Virus bu git cht phôi trong vòng 2 ngày t sau khi gây nhim. u này
p vi các nghiên cc lng git
cht phôi trng trong vòng 48 gi sau khi gây nhim xoang niu mô.
Kt qu
50


virus A/Chicken/Vietnam/NCVD-c trình bày  bng 3.10.
-  n pha loãng 10
-3
, toàn b phôi trng cht trong vòng 40h sau khi gây
nhim.
Bng 3.10. Kt qu theo dõi t l sng/cht ca phôi trng
khi gây nhim virus A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008














virus (%)
A/(A+B)×100
Nhim
virus (A)
Không
nhim
(B)
Tng cng
(A+B)

1
10
-3

5
5
0
20
0
20
100
10
-4

5
5
0
15
0
15
100
10
-5

5
5
0
10
0
10

100
10
-6

5
4
1
5
1
6
83.3
10
-7

5
1
4
1
5
6
16.7
10
-8

5
0
5
0
10
10

0
-)
3
0
3




EID
50
/0,1ml

10
7
-Muench)
2
10
-3

5
5
0
19
0
19
100
10
-4

5
5
0
14
0
14
100
10
-5

5
5
0
9
0
9
100
10
-6

5
3
2
4
1
5
80.0
10
-7

5
1
4
1
5
6
16.7
10
-8

5
0
5
0
10
10
0
-)
3
0
3




EID
50
/0,1 ml

10

6.9
-Muench)
3
10
-3

5
5
0
19
0
19
100
10
-4

5
5
0
14
0
14
100
10
-5

5
5
0
9

0
9
100
10
-6

5
3
2
4
1
5
80.0
10
-7

5
1
4
1
5
6
16.7
10
-8
5
0
5
0
10

10
0
-)
3
0
3



0
EID
50
/0,1 ml
10
6.9
Reed-Muench)
- N 10
-4
:toàn b s phôi trng cht trong ngày th hai, trong khong 40-48
gi sau khi nhim.
- N 10
-5
: git cht toàn b phôi tri
n 10
-3
và 10
-4
 t khi gây nhim.
15

- N 10
-6
:-
1-2 phôi vn còn sng (tùy theo ln thí nghim khác nhau).
- N pha loãng cao nht gây cht phôi trng là 10
-7
, tuy nhiên ch có 1/5
phôi cht  thm 96h , và 4 phôi vn còn sng.
-.
10
7,9
EID
50
/ml.
3.3.2. Tính thích ng trên t nh ch s TCID
50
)
Kt qut TC
/Chicken/Vietnam/NCVD-c trình bày  bng 3.12.
- T n 10
-2
n n 10
-5
toàn b các ging t u có CPE và thm
t  virus phá hy trong vòng 24-72 gic bit  n 10
-2
10
-3
thm
t bào b phá hy hoàn toàn sau 24 gi nhim.

- N 10
-6
 có 3-4 ging có hing bnh tích t bào CPE b
virus phá hy.
Bng 3.12. Kt qu theo dõi bnh tích t bào trên CEF
khi gây nhim virus A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008







ging



CPE


virus (%)
A/(A+B)×100
Nhim
virus (A)
Không
nhim
(B)
Tng cng
(A+B)
1

10
-2

5
5
0
24
0
24
100
10
-3

5
5
0
19
0
19
100
10
-4

5
5
0
14
0
14
100

10
-5

5
5
0
9
0
9
100
10
-6

5
2
3
4
3
7
57.1
10
-7

5
2
3
2
6
8
25

10
-8

5
0
5
0
11
11
0
-)
5
0
5




TCID50/0,1ml
10
6,2

2
10
-2

5

5
0

24
0
24
100
10
-3

5
5
0
19
0
19
100
10
-4

5
5
0
14
0
14
100
10
-5

5
5
0

9
0
9
100
10
-6

5
4
1
4
1
5
80
10
-7

5
0
5
0
6
6
0
10
-8

5
0
5

0
11
11
0
-)
5
0
5




TCID50/0,1ml

10
6,4

3
10
-2

5

5
0
23
0
23
100
10

-3

5
5
0
18
0
18
100
10
-4

5
5
0
13
0
13
100
10
-5

5
5
0
8
0
8
100
10

-6

5
3
2
3
2
5
60
10
-7

5
0
5
0
7
7
0
10
-8

5
0
5
0
12
12
0
-)

5
0
5




TCID50/0,1ml
10
6,2

- N 10
-7
ch có 2 ging nhim virus  ln thí nghim th nht, ln th 2 và
3 không có ging nào nhim virus.
16

- Nng  10
-8
không có CPE, tc là không có hing nhim virus.
10
7,3
TCID50/ml.
3.3.3.Kt qu c lc c/H5N1clade 7
3.3.3.1. Thông s c lc dc tính phân t
c lc và m lây nhim ca virus cúm trên gia cm ph thung
ca enzyme protease ca vt ch n s phá v các liên kt hóa hc và tính th cm
ct t, và s phá v liên kt ca men protease ph thuc vào s ng các
axit an ta gen HA c
arginine (R) và lysine (K).

Khi gii trình t nh m có mt và s ng ca các
n arginine và Lysine t
A/H5N1 clade 7. Kt qu trình t 
      -  t s  
A/H5N1 thuc mt s c so sánh ti bng 3.13.
Bng 3.13. Các a mt s virus cúm
c l
Virus strain
Clade

HA0 cleavage site
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008
7

PQREGGRRRKR*GLF
A/goose/Guangdong/1/96
0

PQRERRRKKR*GLF
A/Hong_Kong/213/03
1
Hong Kong
PQRERRRKKR*GLF
A/chicken/Vietnam/15/2007
1

PQREGRRKKR*GLF
A/chicken/Egypt/9403/2007
2.2


PQGERRRKKR*GLF
A/chicken/Primorje/1/2008
2.3.2
Nga
PQRERRRKR*GLF
A/duck/Vietnam/568/2005
2.3.2
am
PQRERRRKR*GLF
A/Anhui/1/2005
2.3.4

PLRERRRKR*GLF
A/duck/Vietnam/37/2007
2.3.4

PLRERRRKR*GLF
A/chicken/Yunnan/493/2005
2.4

PQRERRRKR*GLF
A/crow/Osaka/102/2004
2.5

PQRE-RRKKR*GLF
A/Pheasant/Hong_Kong/FY155/01
3
Hong Kong
PQRERRRKKR*GLF
A/goose/Guiyang/337/2006

4

PQRERRRKKR*GLF
A/duck/Guangxi/668/2004
5

PQREIRRKKR*GLF
A/chicken/Yichang/lung-1/04
6

PQRERRRKKR*GLF
A/chicken/Shanxi/2/2006
7

PQREGGRRKR*GLF
A/Chicken/Hong_Kong/YU22/2002
8
Hong Kong
PQRERRRKKR*GLF
A/goose/Shantou/1621/05
9

PQRERRRKKR*GLF

0

1

2

Chng A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008 có motif cha nhiu axit 
b, cho th
c li vi gia cm.

17

c lng vt thí nghim
   c lc ca virus này chúng tôi ch s dng mt chng virus là
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008 vì qua phân tích phát sinh loài (phylogeny)
gi
/H5N1clade 7 .
Mng vt thí nghic vi liu 10
6

ng nh . Kt qu tng
hp theo dõi thí nghi   c lc ca virus A/Chicken/Vietnam/NCVD-
c trình bày trong bng 3.14.
Bng 3.14: Kt qu c lc c/H5N1
Clade 7 trên gia cm


ng vt
thí
nghim
S
ng
(con)
Cht
(con)
T

l(%)
m
lâm
sàng
Thi gian
cht trung
bình (ngày)
1
Gà
11
11
100
1.9
5,4
Vt
10
0
0
0
0
Ngan
10
0
0
0
0
2
Gà
10
10

100
1.7
6,2
Vt
10
0
0
0
0
Ngan
10
0
0
0
0
V  A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008) gây cht 100% s gà thí
nghim. Theo tiêu chí v c lc ca virus cúm gia cm ca T chc Thú y th gii-
OIE, c lng tiêu chí phân loi
ca OIE và kt qu ng vi các ch th c lc  m phân t ca vùng

Thi gian gây chng vt thí nghim trung bình - MDT (Mean death time) c
i v
2.
C. Tt c s vu còn
sng sau khi kt thúc thí nghi toàn b s vu khe
mng và không th hin bt k triu chng l nào trong sut 2
tun theo dõi.
Quan sát gà cht có hing phù nh 
khám các bng gut huy
không lông xut huyu, não sung huyt, phi viêm,

t huyt. (Hình 3.8). Mt s bnh tích khác ri rác  mt s 
tim xut huyt, sung huych vành tim. Thn sung huyt. Rut non xut huyt.
c, viêm.
18



u phù nh
Sung huyt não


t huyt



Thn sung huyt
Phi viêm xut huyt
Hình 3.9. Mt s hình nh bnh tích i th gà gây bnh b
A/H5N1Clade 7 (A/Chicken/Vietnam/NCVD 016)
3.3.4. Kt qu  bài thng vt thí nghi

 bài thi virus sau gây nhim bng phn ng realtime RT-
PCR, kt qu trình bày  bng 3.16.
- Toàn b/H5N1 khi
xét nghim bng phn ng RRT-PCR.
- Toàn b các mu vt kiu âm tính, chng t/H5N1clade 7
không có kh m vip vi thc t, khi  Trung
qu phát hin th7 trên gà mà không h phát
hin thy trên vt.
19

B
A/chicken/Vietnam/NCVD-016/2008

Gà

Ngan
Stt

Ct

vòng)


)
Ct

Ct

1
25.3
++
Âm tính
-
27.8
++
2
21.7
+++

Âm tính
-
33.7
+
3
23.9
+++
Âm tính
-
24.9
+++
4
20.7
+++
Âm tính
-
34.1
+
5
28.5
++
Âm tính
-
26.4
++
6
23.2
+++
Âm tính
-

32.6
+
7
22.5
+++
Âm tính
-
Neg

8
19.9
++++
Âm tính
-
36.1
+
9
20.6
+++
Âm tính
-
31.7
+
10
25.2
++
Âm tính
-
31.3
+

11
22.2
+++




Trung bình
23.1
+++ (3)
Âm tính
- (0)
31.0
+(1)

100%
0%
80%
- Tuy nhiên, các mu dch ngoáy hng ngan có kt qu khác vi kt qu ca các
mu vt. Có 8/10 m       m bng RRT-PCR,
mc dù toàn b s u khe mnh v mt lâm sàng
có th nhiông mc bnh.
V chi tit m virus bài thi, hu ht các mu
có m là 3 - 4 (+) giá tr Ct nm trong khong 19,9 - 23,9, và ch có mt s ít m
)  m 2 (+). Tính trung bình, m bài thi virus cúm  gà nhi
/H5N1clade 7 là m 3(+). Kt qu này cho thy khi gà b nhi
/H5N1clade 7 s bài thng lc khi cht.
         tng c   
7
Theo nhiu tác gi,virus cúm gia cc lc cao bên cnh kh 

ng lây nhim cao vi bi  ng hô hp, còn có kh  ng gây tn
        c ng vt cm nhim gi là kh 
nhi tng. Chíc tính này là s phân bit v kh c
lc cc lc lc thp.
ng virus trong ph tng bng phn ng Realtime RT-PCR
        tng c   
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008, chúng tôi thu thp mu ph t  
) và xét nghim bRT-c hiu cho
gen H5/HA ca virus cúm A/H5N1.
20

RRT-
-
        

.
-3.17.
-
/H5N1 clade 7 (NCVD).






Gan

Ct
Log
10

Ct
Log
10

Ct
Log
10

Ct
Log
10

Ct
Log
10

Ct
Log
10

Ct
Log
10

1
13.3
7.6
21.6
5.1

19.4
5.7
18.1
6.2
19.7
5.7
22.5
4.8
24.6
4.2
2
14.5
7.2
21.4
5.1
22.7
4.7
20.2
5.5
22.6
4.8
27.9
3.2
32.4
1.8
3
15.2
7.0
17.7
6.3

19.7
5.6
25.2
4.0
23.2
4.6
26.7
3.5
26.5
3.6
TB
14.3
7.3
20.2
5.5
20.6
5.4
21.1
5.2
21.8
5.0
25.7
3.9
27.8
3.2
Std
1.0
0.3
2.2
0.7

1.8
0.6
3.6
1.1
1.9
0.6
2.8
0.9
4.1
1.2
nh

Kt qu3.11.


3.11. Biu din m nhim virus ca các loi ph tng
qua xét nghim RRT-PCR(chuyi sang log
10
)
nh tích vi th gây ra b/H5N1Clade 7 
ph t
a bnh tích vi th  hin rõ là hich rt
nng  tt c i tng vi dch phù bao quanh thành mch; t bào ni mc
b hot t, bong tróc; các t i thc bào bao quanh thành mch.
u này gii thích lý do tt c  t
u b xut huy . P          
 
.
Não





Gan
Lách
Series1
7.3
5.5
5.4
5.2
5.0
3.9
3.2
0.0
2.0
4.0
6.0
8.0
Log10TCID50
21




Bnh tích vi th thn (nhum IHC)
Bnh tích vi th tim (nhum IHC)


Bnh tích vi th não (nhum IHC)
Bnh tích vi th ty (nhum IHC)

3.13

              
              
.
3.3.6. nh c tính kháng nguyên

Kt qu phn ng HI chéo gia virus và kháng huyt thanh ca các clade virus
A/H5N1 khác nhau cho thy có mt s ng cao gia các virus và kháng huyt
ng chng (hiu giá HI n ng chéo hoc phn ng
chéo có hiu giá rt thp gi các clade khác nhau (Bng 3.19).
Kháng huyc ch t ba chng virus khác nhau
thuc nhóm B, và mt chng thuc  dc hin phn ng HI
chéo v    /H5N1ca các clade khác. Trong khi kháng huyt
thanh kháng virus A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008 không có phn ng vi các
virus clade 1 hoc clade 2.3.4, thì có phn ng chéo vi ma nhóm B
 m hn chn ng chéo v
A. Hi ng kháng huyt thanh kháng virus cúm A/Chicken/Vietnam/NCVD-
016/2008 có phn ng chéo rt hn ch (hiu giá HI thp) hoc không có phn ng
chéo v/H5N1khác thuc clade 7 cho thy s ng v
mt kháng nguyên gi/H5N1trong cùng clade 7 là rt thp.
22

Bng 3.19. Kt qu c tính kháng nguyên c/H5N1
clade 7 phân lc bng phn ng HI




Clade

0
1
2.3.4
2.3.4
7
7B
7A

GS/GD
VN/1203
AN/1/05
CK/VN/35
CK/VN/016
CK/VN/03
CK/VN/93
A/goose/Guangdong/1/96
0
1280
<10
80
80
<10
<10
<10
A/Vietnam/1203/2004
1
80
320
80

160
<10
<10
<10
A/Anhui/1/05
2.3.4
20
<10
1280
160
20
<10
<10
A/chicken/Vietnam/NCVD-035/2008
2.3.4
<10
<10
80
320
<10
<10
<10
A/Chicken/Vietnam/NCVD-016/2008
7
<10
<10
<10
10
640
<10

<10
A/chicken/Vietnam/NCVD-03/2008
7B
<10
<10
<10
20
20
160
<10
A/chicken/Vietnam/NCVD-93/2008
7A
<10
<10
<10
80
<10
<10
160









A/duck/Vietnam/NCVD-159/2008
2.3.4

<10
<10
160
40
10
<10
<10
A/duck/Vietnam/NCVD-160/2008
2.3.4
<10
<10
160
80
10
10
<10
A/chicken/Vietnam/NCVD-185/2008
2.3.4
<10
<10
320
80
10
10
<10
A/duck/Vietnam/NCVD-186/2008
2.3.4
<10
<10
320

80
10
10
<10
A/duck/Vietnam/NCVD-187/2008
2.3.4
<10
<10
320
80
<10
<10
<10
A/chicken/Vietnam/NCVD-188/2008
2.3.4
<10
<10
320
80
<10
<10
<10
A/chicken/Vietnam/NCVD-04/2008
7B
<10
<10
<10
10
<10
160

<10
3.3.7.  o h ca vacxin Re-i v
.
Gà c tiêm phòng vacxin vacxin H5N1 Re-1 lúc 14 ngày tui và công
c lúc 4 tun sau khi tiêm vacxin. S ng gà tiêm phòng vacxin là 10 con và
s i chng không tiêm vacxin c, toàn b s gà
(c lô tiêm vacxin i chc ly máu và kim tra kháng th.
Cc tin hành ti khu chuc an toàn sinh hc
ca Trung tâm Chc vi liu
10
6
TCID50ng nh m trong vòng 10 ngày, ghi li
m lâm sàng hàng ngày và tính t l sng cht nh bo h. Kt
qu chi tit theo dõi thí nghi   u lc vacxin  i vi virus
A/Chicken/Vietnam/NCVD-c trình bày  bng 3.20.
S c tiêm vacxin H5N1 Re-1 sng sót 100% c, 
i cht trong vòng t ngày th n ngày th by
c. Kt qu này cho thy vacxin H5N1 Re-o h cho gà
chng l7.
-
10 sau khi công


va
23

virus va
        
.
Bng 3.20. Kt qu theo dõi thí nghi

vacxin cúm gia cm H5N1 Re-1



S con
cht/tng
s
T l
cht

khi công
Sau khi
công
1
2
3
4
5
6
7
8/10
)
0/10
0%
VX 1
8
12
0
0
0

0
0
0
0
0
VX 2
8
9
0
0
0
0
0
0
0
0
VX 3
7
10
0
0
1
1
1
0
0
0
VX 4
8
10

0
0
0
0
0
0
0
0
VX 5
7
10
0
0
0
0
0
0
0
0
VX 6
7
9
0
0
0
0
0
0
0
0

VX 7
8
10
0
0
0
0
0
0
0
0
VX 8
7
10
0
0
0
0
0
0
0
0
VX 9
8
9
0
0
0
0
0

0
0
0
VX 10
7
9
0
0
0
0
0
0
0
0
)
5/5
100%

-

0
0
1
1
1
2
3


-

0
0
2
2
3




-

0
0
1
2
3




-

0
0
2
3


-

0
0
1
1
2
3


----
Kt qu này có th giúp lý gii tn thy
virus A/H5N1 clade 7  bt k  dc tiêm
- bo h chng li virus này nu có tip
xúc.
KT LUN  NGH
Kt lun
1)  n hành thu thp mu swab gà nhp l    
       -PCR phát hic 15 m

.
2) 
t rt ln 5 so vi các clade virus
khác. Các chng virus thu