Nghiên cứu định tính và định lượng curcuminoid toàn phần và xác định kích thước của chế phẩm nano curcumin chế tạo bằng phương pháp sol gel

BỘ Y TẾ
TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI







PHẠM THỊ HIỀN

NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH
LƢỢNG CURCUMINOID TOÀN PHẦN
VÀ XÁC ĐỊNH KÍCH THƢỚC CỦA
CHẾ PHẨM NANO CURCUMIN CHẾ
TẠO BẰNG PHƢƠNG PHÁP SOL-GEL

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ

HÀ NỘI – 2015


BỘ Y TẾ
TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI
PHẠM THỊ HIỀN

NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH
LƢỢNG CURCUMINOIDTOÀN PHẦN

VÀ XÁC ĐỊNH KÍCH THƢỚC CỦA
CHẾ PHẨM NANO CURCUMIN CHẾ
TẠO BẰNG PHƢƠNG PHÁP SOL-GEL
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ

Ngƣời hƣớng dẫn:
1. PGS.TS. Nguyễn Thị Kiều Anh
2. PGS.TS. Trần Việt Hùng
Nơi thực hiện:
1. Bộ môn Hóa phân tích - Đại học Dược Hà Nội
2. Phòng Thí nghiệm trung tâm - Đại học Dược Hà Nội
3. Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương
4. Viện Khoa học Vật liệu
HÀ NỘI – 2015



LỜI CẢM ƠN
u tiên, tôi xin bày t lòng bi  c ti Cô PGS.TS. Nguyn Th
Kii hc Hà Nng dng,
quan tâm, ch bng viên tôi trong sut quá trình hc tp, nghiên cu thc hin
và hoàn th tài.
Tôi xin chân thành c  y PGS.TS. Trn Vit Hùng, Vin Kim
nghim thung, h tr, quan
tâm và tu kin thun li cho tôi trong sut quá trình tôi thc hi tài.
Xin trân trng cng, cy cô và cán
b ti b môn Hóa phân tích ci hc Hà Nivà các cán b Phòng
Thí nghim Trung Tâm ca Vin Công ngh c phm Quc gia u kin
tt nht, ch bo h tr tôi  tôi tin b  c nghing
thng viên, khích l  ng và quyt tâm.

Xin trân trng cn Tun Anh cùng các cán b Khoa Kim
nghi  c Vin Kim nghim thu      i
Lâm cùng các cán b phòng Vt lý vt liu t và siêu dn ca Vin Khoa hc Vt
liu, Vin Hàn lâm Khoa hc và Công Ngh Viu kin, h tr 
i hc hi và làm thc nghim ti phòng.
Cui cùng tôi xin bày t lòng bi là ch da tinh thn,
luôn bên cng viên, chia s, khuy  tôi có th có kt qu

Hà N
Sinh viên
Phm Th Hin






MỤC LỤC
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
DANH MỤC CÁC BẢNG
DANH MỤC CÁC HÌNH
ĐẶT VẤN ĐỀ 1
CHƢƠNG I. TỔNG QUAN 2
1.1.  curcuminoid 2
1.1.1. Công thc và tính cht lý hóa 2
1.1.2. Nano curcumin 4
1.1.3. Tác dc lý 5
1.1.4. Mt s nghiên cng curcuminoid 6
1.2. Mt s u 9
1.2.1. Sc ký lng hi 9

1.2.2. Vài nét v kính hin t quét 13
CHƢƠNG II. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14
n nghiên cu 14
2.2. Ni dung nghiên cu 15
u 15
2.3.1. Xây dng curcuminoid b
sc ký lng hi 15
c ht nano curcumin 18
 pháp x lý kt qu 19
CHƢƠNG III. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20
3.1. Chun b mu 20


3.1.1. Chun b dung dch chun 20
3.1.2. Chun b dung dch th 20
3.1.3. Chun b mu trng 20
3.2. Xây du kin phân tích curcuminoid bng HPLC 21
3.2.1. Kho sát la chn ct sc ký 21
3.2.2. Kho sát la chc sóng phát hin 21
3.2.3. Kho sát la chn t ng 22
3.2.4. Kho sát la chn th tích tiêm mu 24
3.3. Thng curcuminoid bng HPLC 25
 thích hp ca h thng 25
c hiu 27
 tuyn tính và khong n 28
 chính xác 30
  32
3.4. ng dng curcuminoid trong mu nano curcumin 33
c tiu phân nano curcumin 34
3.6. Bàn lun 35

nh tính và ng curcuminoid 35
c tiu phân nano curcumin 36
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37
TÀI LIỆU THAM KHẢO 39



DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
ACN
Acetonitril
MeOH
Methanol
A.acetic
Acid acetic
HPLC
Sc ký lng hierformance Liquid Chromatography)
RSD
 lch chui (Relative Standard Deviation)
STT
S th t
UV-VIS
T ngoi - kh kin (Ultraviolet - Visible)
V
Th tích
TB
Trung bình
C
Curcumin
DMC
Desmethoxycurcumin

BDMC
Bisdesmethoxycurcumin
SEM
Kính hin t quét (Scanning Electron Microscopy)
TEM
Kính hin t truyn qua (Transmission Electron Microscopy)
tt/tt
Th tích/th tích
HIV
Virus gây suy gim min dch  i (Human Immuno-deficiency
Virus)



DANH MỤC CÁC BẢNG
STT
Tên bng
Trang
1
1.1. 



curcuminoid
3
2
Bng 1.2. Mt s ch phm cha nano curcumin trên th ng
6
3
Bng 1.3. Mt s nghiên c  ng curcuminoid bng

HPLC s dng detector PDA và UV-VIS
8
4
Bng 3.1. Cách pha các dung dch chun
20
5
Bng 3.2. Kt qu kho sát t l ng
22
6
Bng 3.3. Kt qu kh thích hp ca h thng sc ký
25
7
Bng 3.4. Kt qu kh tuyn tính
28
8
Bng 3.5. Kt qu  chính xác
31
9
Bng 3.6. Kt qu  
32
10
Bng 3.7. Kt qu nh lng curcuminoid trong mu nano
curcumin
33




DANH MỤC CÁC HÌNH
STT

Tên hình
Trang
1
Hình 1.1. Công thc cu to ca các curcuminoid
2
2
1.2. A (Curcumin), B (DMC), C (BDMC)
3
3
Hình 1.3. Kính hin t quét FESEM Hitachi S -
4800
13
4
Hình 3.1. Ph hp th UV-VIS ca C, DMC, BDMC
21
5
Hình 3.2. S ca curcuminoid  h ng ACN
: A.acetic 4% (40:60)
23
6
Hình 3.3. S ca curcuminoid  h ng ACN
: A.acetic 4% (50:50)
23
7
Hình 3.4. S ca curcuminoid  h pha ng ACN
: A.acetic 4% (60:40)
23
8
Hình 3.5. S  ca curcuminoid chun  u kin
sc ký la chn

24
9
Hình 3.6. S  thích hp ca h thng
28
10
Hình 3.7. S ca mu placebo
27
11
Hình 3.8. S ca mu chun n 0,06 mg/ml
27
12
 th biu di tuyn tính và khong nng

28
13
Hình 3.10. S ca 5 mu xây dng chun
29
14
Hình 3.11. Hình nh SEM ca tiu phân nano curcumin
34
1



ĐẶT VẤN ĐỀ
Cây Ngh vàng Curcuma longa L. thuc h gng (Zingiberaceae c
trng nhiu  các vùng khí hu nóng m, t Nam. T lâu, cây Ngh
i s dng làm gia v, cht bo qun, cht to màu trong ch bin
thc phm và làm thuc cha bnh. Trong nhng thp k gc
n thêm nhiu tác dng quan trng ca cây Ngh.

Bên cnh tác dng kháng nm, dit khun, dit ký sinh trùng, chng viêm nhim,
bo v da, cây Ngh c bin vi tác dng chng thiu máu cc b, viêm
khp, chng oxi hóa và chng thi các nghiên c ra rng
trong s các thành phn thì curcuminoid chính là nhóm cht chính quynh nhng
hot tính sinh hc quan tr
Mc dù hot tính m     u qu trên lâm sàng ca
curcuminoid li b hn ch do sinh kh dng th nâng cao sinh kh dng ca
curcuminoid nhic thc hin vi các cách tip cn khác nhau,
   c s dng curcuminoid  c nano (hay còn gi là nano
curcumin). Có nhi bào ch 
Sol-c Vin Khoa hc Vt liu s dng bào ch to ra nguyên liu nano
curcumin dng hn dc vi n t 5 - 10%.
Nhm góp phn xây dng tiêu chun chng cho nguyên liu này, chúng
tôi tin hành thc hi tài “Nghiên cứu định tính và định lƣợng curcuminoid
toàn phần và xác định kích thƣớc của chế phẩm nano curcumin chế tạo bằng
phƣơng pháp Sol-gel” vi các mc tiêu sau:
1. Xây d       ng curcuminoidtoàn
phn bc ký lng hi.
2.  nh  c ca ch phm nano curcumin ch to bng
-gel.

2



CHƢƠNG I. TỔNG QUAN
1.1. Đại cƣơng về curcuminoid
1.1.1. Công thức và tính chất lý hóa
 Nguồn gốc
Curcuminoid là nhóm cht chính có trong thành phn hóa hc ca cây Ngh

vàng (Curcuma longa L.), h Gng (Zingiberaceaet chính quyt
nh nhiu tác dng quan trng ca cây Ngh.
Curcuminoid là dn cht ca diaryheptan, gm curcumin,
desmethoxycurcumin (DMC) và bis-desmethoxycurcumin (BDMC).  
curcumin là cht chính chim khong 77%, desmethoxycurcumin chim khong
17% và bis-desmethoxycurcumin chim khong 3%. Curcumin là mt hp cht
polyphenol và chính là cht to nên màu vàng ca cây Ngh [25].
 Công thức cấu tạo

Hình 1.1. Công thức cấu tạo của các curcuminoid
 Công thức phân tử
 Curcumin: C
21
H
20
O
6.

 Demethoxycurcumin: C
20
H
18
O
5.

 Bisdemethoxycurcumin: C
19
H
16
O

4.

 Khối lượng phân tử
3



 Curcumin: 368,38 g/mol.
 Demethoxycurcumin: 338 g/mol.
 Bisdemethoxycurcumin: 308 g/mol.
 Tên khoa học
 Curcumin: (1E,6E)-1,7-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadien-3,5-
dion.
 Demethoxycurcumin: (1E,6E)-1-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-(4-
hydroxyphenyl)hepta-1,6-dien-3,5-dion.
 Bisdemethoxycurcumin: (1E,6E)-1,7-bis(4-hydroxyphenyl)hepta-1,6-dien-
3,5-dion.
 Tính chất lý hóa

Hnh 1.2. A (Curcumin), B (DMC), C (BDMC)
Bảng 1.1. Tính chất vật l đc trƣng của các curcuminoid
Tính chất
Curcumin
DMC
BDMC
Hình dng
Tinh th hình kim

Tinh th hình kim
 cam

Tinh th hình kim
Màu vàng cam
T
nc
(
o
C)
179,5 - 183,5
168,5 - 170,2
213,2 - 215,5
-Vis
trong ethanol (nm)
426
422
418
Rf *
0,53
0,31
0,18
* Sc ký lp mng (Silica gel 60G, F
254
; CH
2
Cl
2
:CH
3
OH = 98:2,tt/tt).
Do t l ca ba loi curcuminoid trong hn hp là khác nhau nên có s khác
bit v giá tr c sóng hp th ci trung bình khi phân tích ba thành phn

4



curcuminoidnh curcuminoid  c sóng
420 nm.Trong khi mt s nghiên cu li lc sóng cc sóng
nm trong khong n 430 nm[7],[20].
1.1.2. Nano curcumin
1.1.2.1. 
ng acid ho
tan 0,1 mg/ml     ng ki  tan 3 mg/ml). Curcumin
ng hòa tan trong các dung môi h    20 mg/ml), ethanol,
dimethylsulfoxid, dimethyl formamid và du. Curcumin không bn và d b phân
h  ng trung tính hoc ki  to thành feruloyl và
acid ferulic, nó ch nh  i 6. Các tính chkhin cho vic s dng
curcumin b hn ch, sinh kh dng ung th nâng cao sinh
kh dng ca curcumin nhic thc hin vi các cách tip cn
khác nhau, c th là s dng:
 T  cn tr quá trình glucuronide hóa
 Curcumin liposomal
 Nano curcumin
 Phc hp curcumin phospholipid
 Các ch cu trúc ca curcumin ví d EF-24.
 thng phân phi hng
ung là mc quan tâm nghiên cu nhiu. H thng phân phi ht kích
c nano bao gm polymeric, ht nano lipid rn (Solid lipid nanoparticles),
t thuc kích
ng trong vic
i cho nhiu sn phm. Nhiu nghiên cng minh
quá trình nano hóa giúp ci thi   sinh kh dng ca thu  

curcuminoid[18].
1.1.2.2. Nano curcumin ch to b-gel
5



Nano curcumin có th c ch to bng nhi dng
các polysaccharidcu trúc nano làm màng bao, s dng l làm nh ti
 c nano Các nhà nghiên cu  Vin Khoa hc Vt li  a chn
- ch to nano curcumin.
Ph   c Sol-gel là mt k thu  to ra mt s sn phm
cóhình dng mong mun  c nano. Nh kh n ln các cht  quy mô
nguyên tSol-gel có th to ra các sn ph ng nh
tinh khit hóa hc cao và mt kh ng là có th khng ch c kích
c, hình dng ca h n, phù
hp vu kin nghiên cu ti Vit Nam, có th u khin
trong quá  to ra các sn ph mun.
Sol-gel là mt quá trình hóa hc, tng hp các phn t huyn
phù dng keo rn trong cht lo thành nguyên ling pha ca
bkhung cht rc chn khi xy ra quá trình chuyn
tipSol-gel. Mt cách tng quát, quá trình Sol-gel là n hóa lý ca s
chuy i ca mt h thng t precursor thành pha loãng dng Sol   o
thành pha rn dng Gel theo mô hình precursor Sol Gel.
Trong quá trình Sol-gel, các phn t trung tâm tri qua 2 phn ng hóa hc
n: phn ng thy phân và phn   i xúc tác axit ho
hình thành mt mi trong toàn dung dch [11], [5].
1.1.3. Tác dụng dược lý
T khoc Công nguyên,   dng c Ngh trong
y h cha tr nhiu bnh tn cui th k 20, các nhà khoa hc
mi nghiên c    c curcuminoid là nhóm ch  

quan trng trong hot tính sinh hc ca c Ngh c bit là curcumin [10]. Nhiu
th nghim lâm sàng  i c thc hi  nghiên cu tác dng ca
u tr các bt kt, bnh
Alzheimer [20], bnh vy nn, hi chng lon sn ty. Các nghiên c
6



thy curcumin có tính cht ch [9], [12], chng viêm khp, chng oxi
hóa, chng thiu máu cc b [21] và kháng viêm [23].
Nh kh u hóa t n hình thành các t bào
i mà không gây hi cho các t bào lành tính bên cnh, curcumin giúp
phòng nga và chng     t nghiên cu v tác dng ca
i vi t y curcumin có th u chnh quá trình
ng xuyên ca t bào, t ng ti s phát trin ca các t bào u,
ung thi không cho thy bt k du hic tính nào và nh sau khi 
vi protein huyt thanh c  i. Các nghiên c   ng minh
curcumin có kh  phát tác ca t  dày, rut, vòm
hng, d con và bàng quang [9].
Nghiên cu ti  cho thu cary có t l i mc
bnh Alzheimer rt thi m cho kh ng bnh Alzheimer ca
curcumin. Theo các nhà khoa hc, curcumin còn có tác dng tt cho não, các
notron, gim stress, trm cm và trng thái lo âu [10].
Không ch vc hi vng có kh u tr viêm
gan B, C và nhim HIV. T c thu
K)  curcumin là mt trong ba cht có tác dng kìm hãm t bào HIV-1,
HIV-1-RT [23].
1.1.4. Một số nghiên cứu định lượng curcuminoid
Trên th gii, nhi c xây d   nh
ng curcuminoid c tng hp  bng 1.3sau:

7



Bảng 1.3. Một số nghiên cứu định lƣợng curcuminoid bằng HPLC sử
dụng detector PDA và UV-VIS
Mu
Png
u kin
TLTK
t curcumin

nano
- A là dung dm
amonium acetate pH 4,5 và
B là ACN.
- u kin gradient:
Bu 95% A, tin ti
55%A  20 phút, cui cùng
là 5%A  33 phút
- c sóng: 420 nm.
- Ct C18 (250 x 4,6 mm, 5
µm)
- T dòng: 1 ml/phút

- Nhi ct 45 ± 2
o
C
[18]
Curcumin và
celecoxib 
c
nano

c (dung dch
A.acetic u chnh pH
n 3 s dng
trietheanolamin 50%, B là
ACN (45:55, tt/tt)
-ac sóng: 254 nm.
- Ct Agilent RP C18 XDB
(150 x 4.6 mm, 5µm)
- T dòng 1,50 ml/phút
[13]
Ht nano
curcuminoid





trong
poly(butyl)
cyanoacrylat
Dung dch acid

trifuroacetic (TFA) 0,1%
(tt/tt) : ACN (1:1, tt/tt)
(

3.0 


amoniac)
- c sóng: 420nm.
- 

 C18
(250 × 4,6 mm, 5 µm)
- 



: 1,5 ml/phút
[16]
Bt thân r
Dung dch acid citric trong
c (1g trong 1000 ml
c): tetrahydrofuran
(6:4, tt/tt).
- c sóng: 420 nm.
- Ct C18 (250 × 4,6 mm, 5
µm)
- T dòng: 1,0 ml/phút
- Th tích tiêm 20 µl.
[24]

Bt thân r
ACN : Dung dch A.acetic
4% (45:55, tt/tt)
- c sóng: 430 nm
- Ct C18 (250x 4,6 mm, 5
µm)
[18]
8



Bt thân r ca
cây Ngh
Dung dch A.acetic :
MeOH (15:85, tt/tt)
-ac sóng: 420 nm.
- Ct Kromasil C18 (250 x
4,6 mm, 5 µm)
[20]
Dch chit ca
Ngh
ACN : Dung dch A.acetic
c (4:6, tt/tt)
-ac sóng: 425 nm.
- Ct C18 (150 x 4,6 mm, 5
µm
[20]
Bt Ngh
ACN : Dung dch A.acetic
c (1:1, tt/tt)

-ac sóng: 260 nm.
- Ct Welchroll-C18 (250 x
4,6 mm, 5 µm)
[20]
M


Curcuma
Hn hp MeOH - H2O
(cha dung dch acid
trifluoroacetic 0.1%) 
ACN (39.5:350:468, tt/tt/tt)
-ac sóng: 425 nm.
- Ct C18 (250 x 4,6 mm, 5
µm)
[20]
Curcuminoid
trong mu thc
phm  Hàn
Quc
Dung dch A.acetic 2%
c (A) và Dung
dch CH3COOH 2% trong
ACN (B)
 Gradient khai trin:
Thi gian T l
0-3 phút 10% B
8 phút 20% B
13 phút 25% B
18 phút 35% B

Gi c khi quay
lu kiu
-ac sóng: 420 nm.
- Ct X Terra MS C18 (250
x 4,6 m, 5 µm)
[20]
Curcumin 
silibinin trong



Acid ortho phosphoric
0,1% : ACN = 50:50,tt/tt
-c sóng: 292 nm.
-aCo,
150x4,6 mm, 5µm).
- T dòng: 1,0 ml/phút
[15]
9



Dch chit ca
Ngh
ACN : Dung dch A.acetic
c (4:6, tt/tt)
-ac sóng: 425 nm.
- Ct Alltect Alltima C18
(150 x 4,6 mm, 5 µm)
[20]

Bt Ngh
ACN : Dung dch A.acetic
c (1:1, tt/tt)
-ac sóng: 260 nm.
- Ct Welchroll-C18 (250 x
4,6 mm, 5 µm)
[20]

1.2. Một số phƣơng pháp phân tích dùng trong nghiên cứu
1.2.1. Sắc ký lỏng hiệu năng cao
1.2.1.1. Nguyên t
c vn chuyn và phân b
giu phân tích  dng dung dch sau khi chuyn lên ct
tách, s c hp phhay liên kt vi ng dch chuyn qua ct sc ký
vi mt t nhnh s y các cht trong mu phân tích ra khi ct. Tùy thuc
vào bn cht cng, bn cht cn cht ca các cht trong
mu phân tích mà quá trình ra gii s tách các cht trong mu phân tích ra khi
nhau. Các cht sau khi ra khi ct s c phát hin bi detector và chuyn tín hiu
ti b x lý kt qu. Kt qu cuc s c hin th trên máy tính hoc
u mu phân tích là hn hp nhiu thành phn thì sau quá trình
tách sc ký ta s c mt s gm nhiu pic [2], [4], [8].
1.2.1.2. Mt s thông s a quá trình sc ký
 Thời gian lƣu t
R
(Retention time)
Thng thi gian c mt cht di chuyn t  tiêm mu,
qua ct sc ký ti detector và cho pic trên s (tính t n lúc xut
hinh ca pic). Tha mi cht là hu kin phân
tích c th, các cht khác nhau thì th khác nhau. Vì vy thi 
 nh tính các cht.

Th thuc vào các yu t:
10



 Bn cht, thành phn, t ng.
 Bn cht sc ký c xp, cu trúc xp ca pha

 Cu to và bn cht ca phân t cht tan, các nhóm th.
 Trong mt s ng hp còn ph thung, n cht
tophc, nu các yu t này có n các cân bng trong quá
trình sc ký.
Trong mt phép phân tích nu t
R
quá nh thì s tách kém, còn t
R
quá ln (t
R
>
20 phút) thì pic b doãn,  lp li kém, thi gian phân tích dài[2], [4], [8].
 Hệ số dung lƣợng k’(Thừa số khối lƣợng)
H s  s ng chng.
Chn cm trong khong t




Bng thc nghi tính theo công thc

R

-t
o
)/t
o

Q
S
ng ch
Q
m
ng chng
t
o
: Thi gian cht
t
R
: Th
 Hệ số đối xứng của pic F
F=

2×


W: Chiu r 1/20 chiu cao pic
a: Khong cách t ng vuông góc h t c ti
v trí 1/20 chiu cao pic.
Theo lý thuyt yêu cu F phi nm trong khong 0,9 - 1,1. Tuy nhiên tùy
theo phép phân tích có yêu cu khác nhau vng yêu cu F nm trong
khong 0,7 - 2,0.
 Số đĩa l thuyết N

11



N = 16 × 




2
= 5,54 × 



1/2

2


W: Chiu r
W
1/2
: Chiu r na chiu cao pic
S  u lc ct sc ký. Tùy phép phân tích mà yêu
cng N > 3000/ct.
 Độ phân giải R
S

R
S

=
2 ×(



)


+ 

=
1,18 ×(



)

1/2
+ 
1/2

Vi:
t
RB
, t
RA
: Tha 2 pic lin k nhau (B và A).
W
B
, W

A
 rng pic  cá
W
1/2B
, W
1/2A
 r na chiu cao pic.
Các giá tr t
RB
, t
RA
, W
B
, W
A
, W
1/2B
, W
1/2A
tính theo cùng m.
Yêu cu: R
S
ng yêu cu R
S

1.2.1.3. ng dng ca HPLC
    ng bng s  u da trên nguyên tc: nng
ca cht phân tích t l vi din tích pic hay chiu cao pic ca nó.
ng s dng trong sc ký:
n ngoi

n
n ni
n hóa din tích
Trong khuôn kh ca khóa lun, tôi xin trình bày c th v  
chun ngoi - chun hóa mm và chun hóa nhim.
 Chun hóa mm: chn n cht phân tích trong mu chun xp x
vi n cht phân tích trong mu th. Tính n ca mu th theo công
thc:
Cx=Cs×



 
12



Cx: N mu th
Sx: Din tích ca pic mu th
Cs: N cht chun
Ss: Din tích ca pic mu chun
 Chun hóa nhim: chun b mt dãy chun vi các n cht chun
n ri tin hành sc kc là các din tích hoc chiu cao
pic  mm chun. V  th biu din s a din tích S (hoc
chiu cao H) ca pic vi n ca cht chun (C).
S dn tuyn tính cng chu tính toán n ca cht cn
nh. Có th tính toán theo 2 cách:
 Áp d kin din tích (hoc chiu cao) pic ca cht th  ng
chun s suy ra n ca nó
 Xây di quy tuyn tính, mô t quan h gia din

tích (hoc chiu cao) ca pic vi n ca cht cnh.
Y=a+ b × 



Y: Din tích pic
 dc cng chun
m cng chun
Cx: N phân tích trong dung dch mu th
Dc n cht th:


=


13




1.2.2.Vài nét về kính hiển vi điện tử quét
 c ht nano có th   nh bng    c ht
Zetasizer Nano, kính hin t bao gm kính hin t quét (TEM), kính
hin t truyn qua (SEM), kính hin t quét truyn qua (STEM) [6].
Hin nay có hai loi kính hin t ch yn t
truyn qua (TEM) và kính hin t quét (SEM), ngoài ra còn có loi kt hp
a hai loi kính trên là hin t quét truyn qua (STEM).
Kính hin n t quét (Scanning Electron Microscope, SEM), là mt loi
kính hin t s dn t (chùm các electron) hp quét trên b mt
mu, các bc x phát ra t n t vi b mt mu s c ghi

nh to ra nh ca b mt mu v phân gii cao.
Cu to chính ca SEM gm cn t, t kính, vt kính), bung
mu, u dò tín hin t, h th[6].

Hình 1.3.Kính hiển vi điện tử quét FESEM Hitachi S - 4800
14



CHƢƠNG II. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tƣợng và phƣơng tiện nghiên cứu
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
 Mu thu ch bSol  gel gm
c và các cht ph gia khác.
 Mu th và mu placebo (thành phn ging mu th   a
curcuminoid do Vin Khoa hc Vt liu cung cp).
2.1.2. Phương tiện nghiên cứu
 Dung môi, hóa chất
 Cht chun: chun làm viccurcuminoid ng 90,0 m 3,0%).
 ACN, MeOH dùng cho HPLC ca Merck - c.
 Acid acetic ba Merck - c.
 c cc ct 2 ln).
 Thiết bị, dụng cụ
 H thng máy HPLC Agilent Technologies 1260 Infinitive, M.
 Kính hin t quét FESEM Hitachi S - 4800.
 c.
  chính xác ± 0,1 mg.
 Phu lc Buchner, b lc dung môi, màng lc mu vi màng l
 Chày, cnh mc, vial, cc có my tinh, l ng mu
và các dng c th chính xác phù hp.

15



2.2. Nội dung nghiên cứu
 Kho sát và la chu kiu kin sc ký).
 Th thích hp ca h thng, tính
c hi tuy  
 ng dnh nh ng curcuminoid trong nano curcumin ch to
bng phSol-gel.
 c nano curcuminbng kính hin t quét.
2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.3.1.Xây dựng quy trình định tính và định lượng curcuminoid bằng phương
pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
2.3.1.1. Khu kin sc ký
Xây d    ng curcuminoid trong
mu th bao gm:
 La chn ct sc ký: trên ctInertsil ODS - 3 C18 (4,6 × 250 mm, 5µm),
Zorbax C18 SB (150 x 4,6 mm, 5µm) và ct Hypersil ODS (4,6 × 250 mm, 5µm),
chn ct có kh  tt và chn lc
 La chc sóng thích hp: Chun b dung dch chun curcuminoid có
n 0,06 mg/ml trong MeOH, quét ph t c sóng 200 nm - 750 nm, chn
c sóng mà tng ca BDMC là cng ca nn mu
là ít nht.
 La chng và t dòng: ng ACN : dung dch A.acetic 4%
vi các t l lt 40:60, 50:50, 60:40 và t dòng vi các mc 1,0 ml/phút,
1,3 ml/phút, 1,5 ml/phút, 1,7 ml/phút và 1,9 ml/phút. La chng và t
dòng cho tha phi, pic ca chi, sc nét, các thành
phn ca curcuminoid tách tt, h s i xng phù hp mà áp sut ct không quá

cao.
 La chn th tích tiêm: vi 3 mc 5 µl, 10 µl, 20µl, la chn th tích tiêm
cho pic gp, không xen ph pic khác.

16



2.3.1.2. Th
ng dn chung thnh quy trình phân tích HPLC nh
ng hot cht trong ch phm [3], [8] chúng tôi tin hành thnh ph
phân tích curcuminoid trong mu phân tích vi các ch tiêu:
  phù hp ca h thng
 Tính chn lc c
  tuyn tính và khong n
   lp l chính xác trung gian)
  
Nghiên cc tin hành trên thit b HPLC.
 Độ phù hợp của hệ thống
 Xác nh tính thích hp ca h thng bng cách tiêm lp li 6 ln liên tip mu
chun curcuminoid có n nm trong khong tuyn tính. Ghi li th
và ding qua các ln sc ký.
 Yêu cu: Chênh lch din tích pic và tha các ln tiêm ca cùng
mt mu, biu th b lch chui (RSD) không l.
 Tính chọn lọc (độ đặc hiệu)
 Chun b mu trng vi các thành ph mu th
curcuminoid và mu curcumin chun trong MeOH. So sánh sc ký
 c t vic phân tích các mu trên.
 Yêu cu: Khi chy mu trng, ti v ng vi t
R

ca C, DMC,
BDMC không xut hin pic.
 Độ tuyến tính và khoảng nồng độ
 Xác lp ma din tích pic và ncurcuminoid. Chun b
mt dãy curcuminoid chung có n 0,03 - 0,06 - 0,09 -
0,12 - 0,16 mg/ml. Su kin, xây di quy và
nh h s 
 Yêu cng hi quy có dng thng và giá tr h s  r
>0,995 [7].
17



 Độ chính xác
  chính xác c thng nht gia các kt qu riêng
bic áp dng lp li nhiu ln trên cùng mt mu
ng nh c biu th b lch chui (RSD). 
chính xác gm 3 m lp l  tái lp. Chúng tôi
ch  lp l chính xác trung gian.
  lp li: tin hành phân tích 6 phép th song song (x lý mu, sc ký) trên
mt mu th. Tính kt qu d ng chu  ng, tin hành
u ki chính xác b lch chui
gia các giá tr ca các lng. Yêu cu: Chênh lch kt qu gia các ln
th, biu th b lch chu
  chính xác trung gian: biu din mng ca kt qu trong cùng mt
phòng thí nghi c thc hin  các ngày khác nhau hoc thit b khác nhau
hoi phân tích khác nhau. Yêu cu: Kh p li kt qu gia các ln th,
biu th b lch chup kt qu ca 2 ngày RSD
].
 Độ đúng

  nh bthêm chun curcuminoid trong
MeOH vào mu thng cht chung vi khong 11%ng
curcuminoid có trong mu th m bo n  trong khong tuyn tính ca
ng). Tin hành sc ký 6 ln th nghim riêng bit. Tính t l
thu hi ca curcuminoid chun thêm vào.
 Yêu cu: T l thu ht 98,0  102,0%, RSD  [7].
2.3.1.3. ng dng curcuminoid trong
mu phân tích.
   nh tính da trên th a pic C, DMC, BDMC trong
dung dch mu th ng vi tha pic C, DMC, BDMC trong dung
dch mu chun.