Bài giảng enzyme inverstase

INVERTASE


Invertase
Invertase là một enzyme thủy phân saccharose
thành glucose và fructose.


Phân loại
Invertase ( EC 3.2.1.26) thuộc nhóm enzyme xúc tác
Hydrolase phản ứng thủy phân có sự tham gia của
H2O).
EC 3: Hydrolase
EC 3.2: Glycosylase
EC 3.2.1: Glycosidase
EC 3.2.1.26: β -D - Fructofuranoside fructohydrolase
(còn gọi là Invertase)


Động học Invertase
• Có vùng pH rộng, từ 3.5 – 5.5, pH tối ưu là 4.5
• Nhiệt độ tối ưu là 55oC; nhiệt độ > 80oC bị bất
hoạt hoàn toàn.
• Bị ức chế bởi các kim loại nặng như Cu, Pb,… do dễ
phá vỡ liên kết disulfide  làm enzyme mất hoạt
tính.


Cấu trúc Invertase
• Tồn tại nhiều dạng khác nhau trong tế bào:
– Dạng hòa tan ( dịch tế bào)

– Dạng liên kết với màng
– Dạng độc lập (hạt)


Cấu trúc bậc 4 của Invertase


Trình tự Invertase


Gen mã hóa Invertase



Ức chế Invertase


Sản xuất Invertase bằng
Saccharomyces cerevisiae


Saccharomyces cerevisiae


Saccharomyces cerevisiae
Chuẩn bị giống:
• Chủng giống được phân lập
• Kiểm định khả năng tổng hợp Invertase
• Giống được chọn để sản xuất invertase được
đem nhân giống.

• Sau đó, tiến hành lên men trong 7 ngày và thu
sinh khối.


Môi trường nhân giống
Thành phần môi trường
Sucrose (g/l)

20

Peptone (g/l)

5

Cao nấm men (g/l)

3

Agar (g/l)

20

pH

6.0

Nhiệt độ (oC)

30

Thời gian (giờ)

48


Môi trường lên men
Thành phần môi trường
Sucrose (g/l)

30

Peptone (g/l)

5

Cao nấm men (g/l)

3

KH2PO4 (g/l)

2.5

MgSO4 (g/l)

2

pH

6.0

Nhiệt độ (oC)

30

Tốc độ khuấy (vòng/phút)

200

Thời gian (ngày)

7


Thu nhận Invertase

Sinh khối
• Nghiền
• Ly tâm

Dịch chiết
• Kết tủa
• Lọc

Enzyme
thô

• Tinh sạch
• Cô đặc

Invertase
• Tự do
• Cố định


Thủy phân Saccharose bằng
Invertase cố định


Cố định enzyme
• Phương pháp hấp phụ
• Phương pháp cộng hóa trị
• Phương pháp liên kết chéo
• Phương pháp bẫy


Cố định trên hạt Calcium alginate
2Na(alginate) + Ca2+ → Ca(Alginate)2 + 2Na+
Ca(Alginate)2: Là một dạng biocomposite không
tan trong nước và dễ dàng tạo hạt hoặc màng.


Nguyên vật liệu

• Invertase thu nhận từ nguồn nấm men S.cerevisiae
của Công ty Cát Tường.
• Sodium alginate của hãng Hải Châu Trung Quốc.


Phương pháp nghiên cứu

Các chỉ tiêu nghiên cứu
• Hiệu suất cố định.
• Hiệu suất hoạt độ riêng cố định.
• pH,nhiệt độ và nồng độ cơ chất tối ưu.
• Số lần tái sử dụng.
• Khả năng thủy phân saccharose theo thời gian


ả
u
q
t
ế
K


Hoạt độ riêng – pH


Hoạt độ riêng – nhiệt độ