Nghiên cứu tính an toàn và khả năng gây đáp ứng miễn dịch trên khỉ Macaca Mulatta của 3 chủng virut rota hệ giống gốc để sản xuất vacxin rota : Luận án TS. Sinh học: 62 42 40 01

DAI HOC QUOC GIA HA NQl
TRlTOfNG DAI HQC KHOA HOC TU^ NHIEN

DANG THI NGAN HA

NGHIEN ClTU TINH ANTOAN VA KHA NANG GAY DAP LTNCi
MIEN D I C H T R E N K H I Macaca

mulatta

CUA

3 CHUNd

VIRUT ROTA H E G I O N G G O C D E SAN XUAT VACXIN ROTA

Chuyen nganh:

Vi sinh vat hoc

Ma so:

62 42 40 01

LUAN AN TIEN SI SINH H O C

NGLT^I

Hl/^NG DAN KHOA HOC:

1. PGS.TS L E THI LUAN

2. PGS.TS NGUYEN DANG HIEN

DAI H O C Q U O C GtA HA NOl
TRUNG TAM T H 6 N G TIN THU VIET

V^U/ 5U
Ha Noi- 2010


MUC LUC
•

•

LOICAMON
LOI CAM DOAN
CAC KI HIEU VA C H C VIET T A T
MUCLUC

DANH MUC CAC BANG
DANH MUC CAC HINH
MCJDAU

1

CHUONG I: TONG QUAN
3
1.1 Virut Rota
3
1.1.1 Ljch siJ phat hien virut Rota

3
1.1.2. Phan loai virut Rota
3
1.1.3. Hinh thai va cau true
4
1.1.4. Cac thanh phan hoa hoc cua virut Rota va chuc nang
6
1.1.5. Phan nhom va typ huyet thanh
10
1.1.6. Tinh chat hoa ly
11
1.1.7. Nuoi cay
13
1.1.8. Su nhan len ciia virut Rota trong te bao
13
1.1.9. Kha nang gay benh
16
1.1.10. Cache gay benh
17
1.1.11. Cac trieu chung cua benh do virut Rota
18
1.1.12. Di^u tri
18
1.1.13. Chan doan virut Rota trong phong thi nghiem
18
1.2. Dich te hoc
20
1.2.1. Nguon benh
20
1.2.2. Lua tuoi mac benh

20
1.2.3. Mua benh
20
1.2.4. Duong lay truyen
21
1.2.5. Milndich
21
1.3. Tinh hinh nhiem virut Rota tren Th^ gioi
22
1.4. Tinh hinh nhiem virut Rota tai Viet Nam
23
1.5. Tinh hinh nghien cuu va phat trien vacxin Rota tren Th^ gioi va trong
nuoc
26
1.5.1. Tinh hinh nghien cuu phat trien vacxin tren Th^ gioi
26
1.5.2. Tinh hinh nghien cuu va phat triln vacxin tai Viet Nam
32


1.6. Tieu chuin ciia T6 chuc Y t^ Th^ gioi ve chiing san xuat vacxin Rota.... 34
1.6.1. Cac thuat ngu
34
1.6.2. Ki€m tra ngu6n nguyen lieu dau
35
1.6.3. Chiing virut
37
1.7. H6 so he thdng chiing gidng ung vien de san xuat vacxin Rota tai Viet
Nam
41

1.7.1. H6 so tom tk cac buoc cay truyen chiing giong goc G1P[8] de tao
chiing ung vien cho san xuat vacxin
42
1.7.2. H6 so tom tat cac buoc cay truyen chiing giong goc G1P[4] de tao
chiing ung vien cho san xuat vacxin
43
1.7.3. H6 so tom tat cac buoc cay truyen chiing giong goc G4P[6] de tao
chiing ung vien cho san xuat vacxin
44
CHLTONG II. DOI TlJONG, VAT LIEU VA PHlTONG PHAP NGHIEN ClTU
45
2.1. Doi tugng nghien cuu
45
2.1.1. Chiing giong goc (Master seed)
45
2.1.2. Chiing san xuat vacxin (Working seed)
46
2.2. Nguyen vat lieu va phuong phap kiem tra he thong chiing
46
2.2.1. Phuang phap xet nghiem vi khuan va nam
46
2.2.2. Phuorng phap thu Mycoplasma bang phuang phap PCR
47
2.2.3. Phuang phap thu vi khuan lao
49
2.2.4. Phuong phap xac dinh virut gay hap phu hong cau
50
2.2.5. Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao than tho so sinh
51
2.2.6. Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao than khi tien phat

52
2.2.7. Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao Vero
53
2.2.8. Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao Hep2C
53
2.2.9. Xac dinh nhan dang virut Rota
54
2.2.10. Phuang phap xac dinh hinh the virut Rota bang kinh hien vi dien tu
62
2.2.11. Phuang phap xac dinh an toan tren dong vat thi nghiem
66
2.2.12. Phuang phap dap ung mien dich tren khi
68
2.2.13. Xac dinh trinh tu gen 4(VP4), 6(VP6), 9(VP7), 10(NSP4) cua virut
Rota
71
2.2.14. Phuang phap thong ke xii ly so lieu
77
CHITONG III: KET QUA VA BAN LUAN
78
3.1. Ket qua kiem dinh tinh an toan he thong chiing virut Rota
78


3.1.1. Kilm tra vi khuAn va nam va vi khuan lao
78
3.1.2. Kiem tra tac nhan ngoai lai trong hon dich chiing virut Rota bang
phuang phap PCR
79
3.1.3. Kiem tra tac nhan ngoai lai gay hiiy hoai te bao trong hon dich chiing

virut Rota tren nuoi cay te bao va hap phu hong cau
80
3.1.4. Kiem tra an toan tren dong vat thi nghiem
82
3.1.5. Quan sat hinh anh chiing virut Rota giong goc tren kinh hien vi dien
tu
93
r

r

r

r

3.1.6. Ket qua nhan dang chiing virut Rota giong goc va chiing san xuat...94
3.1.7. Ket qua giai trinh tu gen he thong chiing virut Rota
101
3.1.8. Xac dinh 11 doan ARN ciia chiing giong goc bang SDS-Page
129
3.2. Ket qua dap ung mien dich he thong chiing tren khi thuc nghiem
130
3.2.1 Ket qua khang the trung hoa tren he thong 3 chiing
130
3.2.2 Ket qua khang the trung hoa tren he thong chiing doi chung
134
KET LUAN
137
KIENNGHI
138

CAC CONG TRINH DA CONG BO CO LIEN QUAN DEN LUAN AN
139
TAI LIEU THAM KHAO