Tài liệu Rút sắc tố từ lá và thực hiện một số phản ứng lí hoá học của clorophin pptx

Bài thực hành 1

Rút sắc tố từ lá và thực
hiện một số phản ứng lí hoá
học của clorophin


1. Nguyên tắc của phương pháp
Do có nhân Mg trong vòng pyron
mang tính tan trong nước và kết hợp
với protein màng, trong khi đó đuôi
dài cacbon của gốc rượu phytol lại
mang tính kị nước và hướng tới cấu
trúc lipit của màng tilacoit, nên phân
tử clorophin chủ yếu hoà tan trong
dung môi hữu cơ. Tuy nhiên để tách
tốt clorophin ra khỏi lá, người ta
không dùng ête petrol hay benzen, mà
dùng cồn hay axeton pha với một ít
nước để tách được hết phân tử
clorophin từ lá. Các sắc tố của nhóm
carotenoit cũng được tách chiết theo
phương pháp này.
2. Đối tượng, hoá chất và dụng cụ thí
nghiệm
- Lá tươi
- Đũa thuỷ tinh
- Cồn etilic hoặc axeton 80%
- Giá ống nghiệm và các ống
nghiệm

- Benzen - KOH 20%
- KOH 20%
- HCL 10%
- Axetat đồng
- CaCO
3

- Bột thuỷ tinh
- Phễu lọc số 3
- Pipet
- Kéo
- ống nhỏ giọt
- Đèn cồn
- Giấy lọc
- Diêm
- Cối chày sứ
3. Các bước tiến hành
Lá tươi được cắt nhỏ trong cối sứ (vứt
bỏ phần gân lá), thêm một ít bột thuỷ
tinh cho dễ nghiền, một ít CaCO
3
để
trung hoà độ axit của dịch tế bào.
Nghiền các mẩu lá cùng với một ít
dung môi (cồn hoặc axeton 80% đã
chuẩn bị) đến khi thành một thể đồng
nhất. Thêm dung môi, rửa chày sứ,
dùng đũa thuỷ tinh đổ dung dịch vào
ống nghiệm qua phễu lọc.
Dung dịch sắc tố thu được sẽ được

dùng để đo hàm lượng sắc tố và tiến
hành một số thí nghiệm nhằm chứng
minh các tính chất lí, hoá học của
clorophin.
a.Xác định hàm lượng clorophin
Đem dịch chiết sắc tố đo trên máy
quang phổ ở các bước sóng 663nm,
645nm. Sau đó sử dụng các công thức
để tính hàm lượng các sắc tố thành
phần như sau:
Clorophin a (mg/ l): 12,7. OD 663 -
2,69. OD 645
Clorophin b (mg/ l): 22,9. OD 645 -
4,68. OD 663
Ghi chú: Công thức này sử dụng cho
dung môi là axeton 80% , OD là số đo
trên máy quang phổ ở các bước sóng
xác định.
Cũng trên dung môi này, nếu đo ở các
bước sóng khác, có thể dùng các công
thức khác như:
Clorophin a (mg/ l): 11,63. OD 665 -
2,39. OD 649
Clorophin b (mg/ l): 20,11. OD 649 -
5,18. OD 665
Clorophin a (mg/ l): 11,78. OD 664 -
2,29. OD 647
Clorophin b (mg/ l): 20,05. OD 647 -
4,77. OD 664
Sau đây là một vài công thức khác khi

sử dụng các dung môi khác nhau:
- Dung môi axeton 100 %:
Clorophin a (mg/ l): 11,70. OD 662 -
2,09. OD 644
Clorophin b (mg/ l): 21,19. OD 644 -