bài giảng công nghệ protein enzyme chương 4 các phương pháp tinh sạch protein enzym

1
1
C
C
á
á
c phương ph
c phương ph
á
á
p tinh
p tinh
s
s
ạ
ạ
ch protein
ch protein
-
-
enzym
enzym
Trong d
Trong d
ị
ị
ch chi
ch chi
ế
ế
t thô thu đư

t thô thu đư
ợ
ợ
c ngo
c ngo
à
à
i protein
i protein
enzyme còn c
enzyme còn c
ó
ó
c
c
á
á
c protein t
c protein t
ạ
ạ
p, c
p, c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t cao

t cao
phân t
phân t
ử
ử
kh
kh
á
á
c như polysaccharid
c như polysaccharid
, acid nucleic
, acid nucleic
v
v
à
à
c
c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t phân t
t phân t
ử
ử
nh

nh
ỏ
ỏ
như đư
như đư
ờ
ờ
ng monose,
ng monose,
c
c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t lipid, mu
t lipid, mu
ố
ố
i kho
i kho
á
á
ng v.v
ng v.v


Đ

Đ
ể
ể
lo
lo
ạ
ạ
i b
i b
ỏ
ỏ
ch
ch
ú
ú
ng ph
ng ph
ả
ả
i s
i s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng ph
ng ph
ố

ố
i h
i h
ợ
ợ
p nhi
p nhi
ề
ề
u
u
bi
bi
ệ
ệ
n ph
n ph
á
á
p kh
p kh
á
á
c nhau.
c nhau.
Lo
Lo
ạ
ạ
i c

i c
á
á
c t
c t
ạ
ạ
p ch
p ch
ấ
ấ
t
t
2
2
Đ
Đ
ể
ể
lo
lo
ạ
ạ
i b
i b
ỏ
ỏ
mu
mu
ố

ố
i kho
i kho
á
á
ng v
ng v
à
à
c
c
á
á
c lo
c lo
ạ
ạ
i
i
đư
đư
ờ
ờ
ng l
ng l
à
à
c
c
á

á
c t
c t
ạ
ạ
p ch
p ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
phân t
phân t
ử
ử
lư
lư
ợ
ợ
ng
ng
th
th
ấ
ấ
p ngư
p ngư
ờ

ờ
i ta thư
i ta thư
ờ
ờ
ng d
ng d
ù
ù
ng phương ph
ng phương ph
á
á
p
p
th
th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch (d
ch (d
ialysis)
ialysis)
đ
đ
ố

ố
i nư
i nư
ớ
ớ
c hay đ
c hay đ
ố
ố
i
i
c
c
á
á
c dung d
c dung d
ị
ị
ch đ
ch đ
ệ
ệ
m loãng ho
m loãng ho
ặ
ặ
c b
c b
ằ

ằ
ng
ng
c
c
á
á
ch l
ch l
ọ
ọ
c qua gel sephadex.
c qua gel sephadex.
Lo
Lo
ạ
ạ
i c
i c
á
á
c t
c t
ạ
ạ
p ch
p ch
ấ
ấ
t

t
3
3
Đ
Đ
ể
ể
lo
lo
ạ
ạ
i b
i b
ỏ
ỏ
c
c
á
á
c protein t
c protein t
ạ
ạ
p v
p v
à
à
c
c
á

á
c t
c t
ạ
ạ
p ch
p ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
phân t
phân t
ử
ử
lư
lư
ợ
ợ
ng cao kh
ng cao kh
á
á
c,
c,
ngư
ngư
ờ

ờ
i ta hay d
i ta hay d
ù
ù
ng k
ng k
ế
ế
t
t
h
h
ợ
ợ
p nhi
p nhi
ề
ề
u bi
u bi
ệ
ệ
n ph
n ph
á
á
p kh
p kh
á

á
c nhau:
c nhau:
phương ph
phương ph
á
á
p
p
bi
bi
ế
ế
n t
n t
í
í
nh ch
nh ch
ọ
ọ
n l
n l
ọ
ọ
c nh
c nh
ờ
ờ
t

t
á
á
c d
c d
ụ
ụ
ng c
ng c
ủ
ủ
a nhi
a nhi
ệ
ệ
t đ
t đ
ộ
ộ
ho
ho
ặ
ặ
c pH c
c pH c
ủ
ủ
a môi trư
a môi trư
ờ

ờ
ng, p
ng, p
hương ph
hương ph
á
á
p k
p k
ế
ế
t t
t t
ủ
ủ
a
a
phân đo
phân đo
ạ
ạ
n b
n b
ằ
ằ
ng mu
ng mu
ố
ố
i trung t

i trung t
í
í
nh ho
nh ho
ặ
ặ
c c
c c
á
á
c dung
c dung
môi h
môi h
ữ
ữ
u cơ
u cơ
, c
, c
á
á
c phương ph
c phương ph
á
á
p s
p s
ắ

ắ
c ký trao đ
c ký trao đ
ổ
ổ
i
i
ion,
ion,
đi
đi
ệ
ệ
n di,
n di,
phương ph
phương ph
á
á
p l
p l
ọ
ọ
c gel.
c gel.
Lo
Lo
ạ
ạ
i c

i c
á
á
c t
c t
ạ
ạ
p ch
p ch
ấ
ấ
t
t
4
4
M
M
ộ
ộ
t trong nh
t trong nh
ữ
ữ
ng k
ng k
ỹ
ỹ
thu
thu
ậ

ậ
t không th
t không th
ể
ể
thi
thi
ế
ế
u đư
u đư
ợ
ợ
c trong vi
c trong vi
ệ
ệ
c
c
t
t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t v
t v
à

à
tinh ch
tinh ch
ế
ế
protein l
protein l
à
à
ly tâm.
ly tâm.
M
M
á
á
y ly tâm đư
y ly tâm đư
ợ
ợ
c s
c s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng đ
ng đ
ể

ể
t
t
á
á
ch c
ch c
á
á
c ph
c ph
ầ
ầ
n kh
n kh
á
á
c nhau kh
c nhau kh
ỏ
ỏ
i
i
dung d
dung d
ị
ị
ch. N
ch. N
gư

gư
ờ
ờ
i ta g
i ta g
ọ
ọ
i pha l
i pha l
ỏ
ỏ
ng l
ng l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t l
t l
ỏ
ỏ
ng bên trên k
ng bên trên k
ế
ế
t
t
t

t
ủ
ủ
a, pha r
a, pha r
ắ
ắ
n m
n m
à
à
thư
thư
ờ
ờ
ng l
ng l
ắ
ắ
ng k
ng k
ế
ế
t xu
t xu
ố
ố
ng đ
ng đ
á

á
y
y
ố
ố
ng ly tâm
ng ly tâm
đư
đư
ợ
ợ
c g
c g
ọ
ọ
i l
i l
à
à
k
k
ế
ế
t t
t t
ủ
ủ
a. Th
a. Th
ự

ự
c ch
c ch
ấ
ấ
t, s
t, s
ự
ự
ly tâm tăng t
ly tâm tăng t
ố
ố
c đ
c đ
ộ
ộ
k
k
ế
ế
t
t
t
t
ủ
ủ
a c
a c
ủ

ủ
a nh
a nh
ữ
ữ
ng ti
ng ti
ể
ể
u ph
u ph
ầ
ầ
n r
n r
ắ
ắ
n nh
n nh
ờ
ờ
l
l
ự
ự
c ly tâm. S
c ly tâm. S
ự
ự
sai kh

sai kh
á
á
c v
c v
ề
ề
t
t
ỷ
ỷ
tr
tr
ọ
ọ
ng c
ng c
ủ
ủ
a nguyên li
a nguyên li
ệ
ệ
u lơ l
u lơ l
ữ
ữ
ng so v
ng so v
ớ

ớ
i ch
i ch
ấ
ấ
t l
t l
ỏ
ỏ
ng c
ng c
à
à
ng l
ng l
ớ
ớ
n
n
th
th
ì
ì
t
t
ố
ố
c đ
c đ
ộ

ộ
k
k
ế
ế
t t
t t
ủ
ủ
a s
a s
ẽ
ẽ
c
c
à
à
ng cao. M
ng cao. M
ặ
ặ
c d
c d
ầ
ầ
u ngư
u ngư
ờ
ờ
i ta coi s

i ta coi s
ố
ố
vòng quay trong m
vòng quay trong m
ộ
ộ
t ph
t ph
ú
ú
t l
t l
à
à
đơn v
đơn v
ị
ị
thông thư
thông thư
ờ
ờ
ng c
ng c
ủ
ủ
a l
a l
ự

ự
c ly
c ly
tâm, n
tâm, n
hưng quy ư
hưng quy ư
ớ
ớ
c
c
ấ
ấ
y không th
y không th
ỏ
ỏ
a mãn.
a mãn.
C
C
á
á
c k
c k
ỹ
ỹ
thu
thu
ậ

ậ
t thông thư
t thông thư
ờ
ờ
ng
ng
trong tinh s
trong tinh s
ạ
ạ
ch protein
ch protein
Ly tâm
Ly tâm
5
5
C
C
ó
ó
nh
nh
ữ
ữ
ng nguyên t
ng nguyên t
ắ
ắ
c đ

c đ
ể
ể
l
l
à
à
m vi
m vi
ệ
ệ
c an
c an
to
to
à
à
n hơn v
n hơn v
ớ
ớ
i m
i m
á
á
y ly tâm đ
y ly tâm đ
ố
ố
i v

i v
ớ
ớ
i
i
ngư
ngư
ờ
ờ
i thao t
i thao t
á
á
c c
c c
ũ
ũ
ng như đ
ng như đ
ố
ố
i v
i v
ớ
ớ
i
i
nguyên li
nguyên li
ệ

ệ
u đư
u đư
ợ
ợ
c x
c x
ử
ử
lý m
lý m
à
à
l
l
ú
ú
c th
c th
í
í
nghi
nghi
ệ
ệ
m c
m c
ầ
ầ
n ch

n ch
ú
ú
ý tuân th
ý tuân th
ủ
ủ
.
.
Đ
Đ
ó
ó
l
l
à
à
nguyên t
nguyên t
ắ
ắ
c cân b
c cân b
ằ
ằ
ng đ
ng đ
ố
ố
i x

i x
ứ
ứ
ng khi ly
ng khi ly
tâm v
tâm v
à
à
thăng b
thăng b
ằ
ằ
ng m
ng m
á
á
y ly tâm
y ly tâm
khi
khi
đ
đ
ặ
ặ
t m
t m
á
á
y l

y l
à
à
m vi
m vi
ệ
ệ
c.
c.
Ly tâm
Ly tâm
6
6
Do t
Do t
í
í
nh ch
nh ch
ấ
ấ
t không b
t không b
ề
ề
n v
n v
ớ
ớ
i nhi

i nhi
ệ
ệ
t c
t c
ủ
ủ
a ph
a ph
ầ
ầ
n l
n l
ớ
ớ
n
n
c
c
á
á
c protein enzyme, khi t
c protein enzyme, khi t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t tinh ch

t tinh ch
ế
ế
ch
ch
ú
ú
ng, c
ng, c
ầ
ầ
n s
n s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng
ng
m
m
á
á
y ly tâm l
y ly tâm l
ạ
ạ
nh

nh
. T
. T
rong
rong
trư
trư
ờ
ờ
ng h
ng h
ợ
ợ
p
p
đi
đi
ề
ề
u ki
u ki
ệ
ệ
n th
n th
í
í
nghi
nghi
ệ

ệ
m c
m c
ó
ó
h
h
ạ
ạ
n ch
n ch
ế
ế
, c
, c
ó
ó
th
th
ể
ể
s
s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng m

ng m
ộ
ộ
t s
t s
ố
ố
phương c
phương c
á
á
ch nh
ch nh
ằ
ằ
m đ
m đ
ả
ả
m
m
b
b
ả
ả
o duy tr
o duy tr
ì
ì
m

m
ẫ
ẫ
u
u
ở
ở
nhi
nhi
ệ
ệ
t đ
t đ
ộ
ộ
th
th
ấ
ấ
p.
p.
C
C
ầ
ầ
n l
n l
à
à
m l

m l
ạ
ạ
nh
nh
t
t
ố
ố
t m
t m
ẫ
ẫ
u v
u v
à
à
ố
ố
ng ly tâm trư
ng ly tâm trư
ớ
ớ
c khi ly tâm
c khi ly tâm
. N
. N
ế
ế
u

u
trong m
trong m
á
á
y c
y c
ó
ó
c
c
á
á
c
c
ổ
ổ
đ
đ
ệ
ệ
m thay th
m thay th
ế
ế
c
c
ó
ó
th

th
ể
ể
l
l
à
à
m
m
l
l
ạ
ạ
nh ch
nh ch
ú
ú
ng trong t
ng trong t
ủ
ủ
l
l
ạ
ạ
nh trư
nh trư
ớ
ớ
c khi ly tâm. C

c khi ly tâm. C
ầ
ầ
n
n
ph
ph
ả
ả
i ti
i ti
ế
ế
n h
n h
à
à
nh ly tâm v
nh ly tâm v
ớ
ớ
i th
i th
ờ
ờ
i gian t
i gian t
ố
ố
i thi

i thi
ể
ể
u đ
u đ
ể
ể
tr
tr
á
á
nh n
nh n
ó
ó
ng m
ng m
á
á
y. C
y. C
ó
ó
th
th
ể
ể
đ
đ
ặ

ặ
t tr
t tr
ự
ự
c ti
c ti
ế
ế
p m
p m
á
á
y ly
y ly
tâm b
tâm b
é
é
v
v
à
à
o t
o t
ủ
ủ
l
l
ạ

ạ
nh,
nh,
đưa dây d
đưa dây d
ẫ
ẫ
n ra ngo
n ra ngo
à
à
i qua
i qua
l
l
ớ
ớ
p đ
p đ
ệ
ệ
m c
m c
ủ
ủ
a c
a c
á
á
nh c

nh c
ử
ử
a t
a t
ủ
ủ
l
l
ạ
ạ
nh
nh
Ly tâm
Ly tâm
7
7
Th
Th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch l
ch l
à
à
s

s
ự
ự
khu
khu
ế
ế
ch t
ch t
á
á
n vi phân qua m
n vi phân qua m
à
à
ng v
ng v
ố
ố
n
n
không th
không th
ấ
ấ
m đ
m đ
ố
ố
i v

i v
ớ
ớ
i nh
i nh
ữ
ữ
ng ch
ng ch
ấ
ấ
t keo hòa tan (protein,
t keo hòa tan (protein,
m
m
ộ
ộ
t s
t s
ố
ố
c
c
á
á
c polysaccharid)
c polysaccharid)
nhưng th
nhưng th
ấ

ấ
m đ
m đ
ố
ố
i v
i v
ớ
ớ
i c
i c
á
á
c
c
d
d
ạ
ạ
ng d
ng d
ị
ị
ch c
ch c
á
á
c tinh th
c tinh th
ể

ể
.C
.C
á
á
c tinh th
c tinh th
ể
ể
(c
(c
á
á
c mu
c mu
ố
ố
i, c
i, c
á
á
c h
c h
ợ
ợ
p
p
ch
ch
ấ

ấ
t h
t h
ữ
ữ
u cơ c
u cơ c
ó
ó
tr
tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
th
th
ấ
ấ
p ) c
p ) c
ó
ó
th

th
ể
ể
khu
khu
ế
ế
ch t
ch t
á
á
n qua m
n qua m
à
à
ng theo đ
ng theo đ
ị
ị
nh lu
nh lu
ậ
ậ
t Fick.
t Fick.
Nư
Nư
ớ
ớ
c s

c s
ẽ
ẽ
khu
khu
ế
ế
ch t
ch t
á
á
n t
n t
ừ
ừ
dung d
dung d
ị
ị
ch c
ch c
ó
ó
n
n
ồ
ồ
ng đ
ng đ
ộ

ộ
th
th
ấ
ấ
p hơn
p hơn
(t
(t
hư
hư
ờ
ờ
ng l
ng l
à
à
dung d
dung d
ị
ị
ch r
ch r
ử
ử
a) v
a) v
à
à
o dung d

o dung d
ị
ị
ch keo,
ch keo,
trong khi
trong khi
đ
đ
ó
ó
c
c
á
á
c ion (cation v
c ion (cation v
à
à
anion) v
anion) v
à
à
c
c
á
á
c ch
c ch
ấ

ấ
t phân t
t phân t
ử
ử
nh
nh
ỏ
ỏ
s
s
ẽ
ẽ
chuy
chuy
ể
ể
n v
n v
à
à
o dung d
o dung d
ị
ị
ch c
ch c
ó
ó
n

n
ồ
ồ
ng đ
ng đ
ộ
ộ
th
th
ấ
ấ
p hơn
p hơn
(t
(t
hư
hư
ờ
ờ
ng
ng
chuy
chuy
ể
ể
n v
n v
à
à
o dung d

o dung d
ị
ị
ch r
ch r
ử
ử
a).
a).
Th
Th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch
ch
8
8
Trong qu
Trong qu
á
á
tr
tr
ì
ì
nh t

nh t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t v
t v
à
à
tinh s
tinh s
ạ
ạ
ch protein,
ch protein,
đ
đ
ể
ể
lo
lo
ạ
ạ
i
i
mu
mu
ố

ố
i ammonium sulphate ra kh
i ammonium sulphate ra kh
ỏ
ỏ
i dung d
i dung d
ị
ị
ch protein th
ch protein th
ì
ì
cho dung d
cho dung d
ị
ị
ch protein v
ch protein v
à
à
o c
o c
á
á
i t
i t
ú
ú
i đ

i đ
ặ
ặ
c hi
c hi
ệ
ệ
u l
u l
à
à
m b
m b
ằ
ằ
ng
ng
nguyên li
nguyên li
ệ
ệ
u b
u b
á
á
n th
n th
ấ
ấ
m.

m.
Thông thư
Thông thư
ờ
ờ
ng ngư
ng ngư
ờ
ờ
i ta hay
i ta hay
d
d
ù
ù
ng t
ng t
ú
ú
i colodion ho
i colodion ho
ặ
ặ
c cellophane (lo
c cellophane (lo
ạ
ạ
i sau hay đư
i sau hay đư
ợ

ợ
c
c
d
d
ù
ù
ng hơn
ng hơn
). Sa
). Sa
u đ
u đ
ó
ó
đ
đ
ặ
ặ
t c
t c
ả
ả
t
t
ú
ú
i v
i v
à

à
o b
o b
ì
ì
nh ch
nh ch
ứ
ứ
a lư
a lư
ợ
ợ
ng l
ng l
ớ
ớ
n
n
nư
nư
ớ
ớ
c ho
c ho
ặ
ặ
c lư
c lư
ợ

ợ
ng l
ng l
ớ
ớ
n dung d
n dung d
ị
ị
ch đ
ch đ
ệ
ệ
m đư
m đư
ợ
ợ
c pha loãng (v
c pha loãng (v
í
í
d
d
ụ
ụ


đ
đ
ệ

ệ
m phosphate c
m phosphate c
ó
ó
pH = 7, n
pH = 7, n
ồ
ồ
ng đ
ng đ
ộ
ộ
0,01M). V
0,01M). V
ì
ì
m
m
à
à
ng
ng
cellophane l
cellophane l
à
à
m
m
à

à
ng b
ng b
á
á
n th
n th
ấ
ấ
m, c
m, c
ó
ó
k
k
í
í
ch thư
ch thư
ớ
ớ
c l
c l
ỗ
ỗ
ch
ch
ỉ
ỉ
cho c

cho c
á
á
c
c
ch
ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
phân t
phân t
ử
ử
đi qua v
đi qua v
à
à
o c
o c
á
á
c dung d
c dung d
ị
ị
ch đ

ch đ
ệ
ệ
m loãng theo
m loãng theo
đ
đ
ị
ị
nh lu
nh lu
ậ
ậ
t khu
t khu
ế
ế
ch t
ch t
á
á
n.
n.
Như v
Như v
ậ
ậ
y, mu
y, mu
ố

ố
i s
i s
ẽ
ẽ
khuy
khuy
ế
ế
n t
n t
á
á
n v
n v
à
à
o
o
nư
nư
ớ
ớ
c ho
c ho
ặ
ặ
c dung d
c dung d
ị

ị
ch đêm loãng
ch đêm loãng
(di chuy
(di chuy
ể
ể
n theo hư
n theo hư
ớ
ớ
ng
ng
gi
gi
ả
ả
m n
m n
ồ
ồ
ng đ
ng đ
ộ
ộ
),
),
còn nư
còn nư
ớ

ớ
c ho
c ho
ặ
ặ
c đ
c đ
ệ
ệ
m loãng s
m loãng s
ẽ
ẽ
di chuy
di chuy
ể
ể
n t
n t
ừ
ừ
dung d
dung d
ị
ị
ch r
ch r
ử
ử
a v

a v
à
à
o t
o t
ú
ú
i ch
i ch
ứ
ứ
a protein.
a protein.
Th
Th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch
ch
9
9
Protein l
Protein l
à
à
nh

nh
ữ
ữ
ng đ
ng đ
ạ
ạ
i phân t
i phân t
ử
ử
không th
không th
ể
ể
vư
vư
ợ
ợ
t qua
t qua
t
t
ú
ú
i th
i th
ẩ
ẩ
m t

m t
í
í
ch v
ch v
à
à
đư
đư
ợ
ợ
c gi
c gi
ử
ử
l
l
ạ
ạ
i trong t
i trong t
ú
ú
i. B
i. B
ằ
ằ
ng c
ng c
á

á
ch
ch
thay đ
thay đ
ổ
ổ
i thư
i thư
ờ
ờ
ng xuyên dung d
ng xuyên dung d
ị
ị
ch r
ch r
ử
ử
a c
a c
ó
ó
th
th
ể
ể
t
t
ẩ

ẩ
y
y
s
s
ạ
ạ
ch mu
ch mu
ố
ố
i ra kh
i ra kh
ỏ
ỏ
i protein , m
i protein , m
ặ
ặ
c d
c d
ầ
ầ
u trong qu
u trong qu
á
á
tr
tr
ì

ì
nh th
nh th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch, n
ch, n
ó
ó
l
l
à
à
dung d
dung d
ị
ị
ch đư
ch đư
ợ
ợ
c pha loãng
c pha loãng
hơn
hơn
. C

. C
ó
ó
th
th
ể
ể
l
l
à
à
m gi
m gi
ả
ả
m b
m b
ớ
ớ
t ho
t ho
ặ
ặ
c lo
c lo
ạ
ạ
i tr
i tr
ừ

ừ
s
s
ự
ự
pha
pha
loãng như th
loãng như th
ế
ế
khi ti
khi ti
ế
ế
n h
n h
à
à
nh th
nh th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch dư
ch dư
ớ

ớ
i
i
á
á
p
p
su
su
ấ
ấ
t, c
t, c
ó
ó
ngh
ngh
ĩ
ĩ
a l
a l
à
à
khi dung d
khi dung d
ị
ị
ch đư
ch đư
ợ

ợ
c x
c x
ử
ử
lý n
lý n
ằ
ằ
m
m
dư
dư
ớ
ớ
i m
i m
ộ
ộ
t
t
á
á
p su
p su
ấ
ấ
t th
t th
ủ

ủ
y t
y t
ĩ
ĩ
nh đ
nh đ
ầ
ầ
y đ
y đ
ủ
ủ
,
,
đ
đ
ể
ể
dòng th
dòng th
ủ
ủ
y
y
đ
đ
ộ
ộ
ng h

ng h
ọ
ọ
c c
c c
ủ
ủ
a nư
a nư
ớ
ớ
c t
c t
ừ
ừ
dung d
dung d
ị
ị
ch s
ch s
ẽ
ẽ
cân b
cân b
ằ
ằ
ng s
ng s
ự

ự
khu
khu
ế
ế
ch t
ch t
á
á
n c
n c
ủ
ủ
a c
a c
á
á
c phân t
c phân t
ử
ử
v
v
à
à
o dung d
o dung d
ị
ị
ch.

ch.
Phương ph
Phương ph
á
á
p n
p n
à
à
y thư
y thư
ờ
ờ
ng đòi h
ng đòi h
ỏ
ỏ
i c
i c
ó
ó
thi
thi
ế
ế
t b
t b
ị
ị
đ

đ
ặ
ặ
c
c
bi
bi
ệ
ệ
t.
t.
Th
Th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch
ch
10
10
Th
Th
ẩ
ẩ
m t
m t
í

í
ch
ch
11
11
Phương ph
Phương ph
á
á
p th
p th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch thông thư
ch thông thư
ờ
ờ
ng l
ng l
à
à
cho dung d
cho dung d
ị
ị
ch c

ch c
ó
ó
k
k
ế
ế
t t
t t
ủ
ủ
a protein v
a protein v
à
à
o t
o t
ú
ú
i th
i th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch (không qu
ch (không qu
á

á
2/3 th
2/3 th
ể
ể
t
t
í
í
ch
ch
t
t
ú
ú
i). Cho thu
i). Cho thu
ố
ố
c s
c s
á
á
t tr
t tr
ù
ù
ng ho
ng ho
ặ

ặ
c toluen đ
c toluen đ
ể
ể
b
b
ả
ả
o qu
o qu
ả
ả
n protein
n protein
(v
(v
ì
ì
th
th
ờ
ờ
i gian th
i gian th
ẩ
ẩ
m t
m t
í

í
ch lâu, protein c
ch lâu, protein c
ó
ó
th
th
ể
ể
b
b
ị
ị
th
th
ố
ố
i h
i h
ỏ
ỏ
ng).
ng).
Bu
Bu
ộ
ộ
c t
c t
ú

ú
i v
i v
à
à
o m
o m
ộ
ộ
t que th
t que th
ủ
ủ
y tinh, g
y tinh, g
á
á
c que th
c que th
ủ
ủ
y tinh lên
y tinh lên
mi
mi
ệ
ệ
ng ch
ng ch
ậ

ậ
u nư
u nư
ớ
ớ
c đ
c đ
ể
ể
gi
gi
ữ
ữ
t
t
ú
ú
i
i
ở
ở
gi
gi
ữ
ữ
a ch
a ch
ậ
ậ
u.

u.
Cho vòi nư
Cho vòi nư
ớ
ớ
c
c
ch
ch
ả
ả
y nh
y nh
ẹ
ẹ
liên t
liên t
ụ
ụ
c v
c v
à
à
o đ
o đ
á
á
y ch
y ch
ậ

ậ
u đ
u đ
ể
ể
thay đ
thay đ
ổ
ổ
i nư
i nư
ớ
ớ
c thư
c thư
ờ
ờ
ng
ng
xuyên. Mu
xuyên. Mu
ố
ố
i (NH
i (NH
2
2
)SO
)SO
4

4
hòa tan trong nư
hòa tan trong nư
ớ
ớ
c v
c v
à
à
b
b
ị
ị
lo
lo
ạ
ạ
i d
i d
ầ
ầ
n.
n.
Th
Th
ờ
ờ
i gian th
i gian th
ẩ

ẩ
m t
m t
í
í
ch c
ch c
ó
ó
th
th
ể
ể
t
t
ừ
ừ
24
24
-
-
48 gi
48 gi
ờ
ờ
, l
, l
à
à
m th

m th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch
ch
l
l
ầ
ầ
n cu
n cu
ố
ố
i c
i c
ù
ù
ng b
ng b
ằ
ằ
ng nư
ng nư
ớ
ớ
c c

c c
ấ
ấ
t.
t.
C
C
ó
ó
th
th
ể
ể
tăng t
tăng t
ố
ố
c đ
c đ
ộ
ộ
th
th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch khi khu

ch khi khu
ấ
ấ
y dung d
y dung d
ị
ị
ch r
ch r
ử
ử
a
a
b
b
ằ
ằ
ng m
ng m
á
á
y tr
y tr
ộ
ộ
n cơ h
n cơ h
ọ
ọ
c hay m

c hay m
á
á
y tr
y tr
ộ
ộ
n t
n t
ừ
ừ
ho
ho
ặ
ặ
c l
c l
à
à
quay ch
quay ch
ậ
ậ
m
m
t
t
ú
ú
i nh

i nh
ờ
ờ
đ
đ
ộ
ộ
ng cơ không l
ng cơ không l
ớ
ớ
n. Khi th
n. Khi th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch c
ch c
á
á
c protein
c protein
thư
thư
ờ
ờ
ng ngư

ng ngư
ờ
ờ
i ta ti
i ta ti
ế
ế
n h
n h
à
à
nh t
nh t
ấ
ấ
t c
t c
ả
ả
c
c
á
á
c thao t
c thao t
á
á
c
c
ở

ở
môi
môi
trư
trư
ờ
ờ
ng l
ng l
ạ
ạ
nh.
nh.
Th
Th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch
ch
12
12
S
S
ắ
ắ
c ký l

c ký l
ọ
ọ
c gel l
c gel l
à
à
m
m
ộ
ộ
t trong nh
t trong nh
ữ
ữ
ng k
ng k
ỹ
ỹ
thu
thu
ậ
ậ
t s
t s
ắ
ắ
c ký
c ký
c

c
ộ
ộ
t đư
t đư
ợ
ợ
c d
c d
ù
ù
ng ph
ng ph
ổ
ổ
bi
bi
ế
ế
n trong t
n trong t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t v
t v
à

à
tinh
tinh
s
s
ạ
ạ
ch protein.
ch protein.
D
D
ị
ị
ch chi
ch chi
ế
ế
t protein enzyme đã đư
t protein enzyme đã đư
ợ
ợ
c lo
c lo
ạ
ạ
i b
i b
ỏ
ỏ
ph

ph
ầ
ầ
n
n
l
l
ớ
ớ
n c
n c
á
á
c protein t
c protein t
ạ
ạ
p nhưng v
p nhưng v
ẫ
ẫ
n chưa đ
n chưa đ
ả
ả
m b
m b
ả
ả
o đ

o đ
ộ
ộ


đ
đ
ồ
ồ
ng nh
ng nh
ấ
ấ
t c
t c
ầ
ầ
n thi
n thi
ế
ế
t đư
t đư
ợ
ợ
c ti
c ti
ế
ế
p t

p t
ụ
ụ
c l
c l
à
à
m s
m s
ạ
ạ
ch b
ch b
ằ
ằ
ng
ng
phương ph
phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký c
c ký c
ộ
ộ
t.

t.
Phương ph
Phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký (chromatography) l
c ký (chromatography) l
à
à
do hai
do hai
ch
ch
ữ
ữ
"chroma" l
"chroma" l
à
à
m
m
à
à
u s
u s
ắ

ắ
c v
c v
à
à
"grapho" l
"grapho" l
à
à
vi
vi
ế
ế
t,
t,
ngh
ngh
ĩ
ĩ
a l
a l
à
à
vi
vi
ế
ế
t b
t b
ằ

ằ
ng m
ng m
à
à
u. Thu
u. Thu
ở
ở
ban đ
ban đ
ầ
ầ
u,
u,
ngư
ngư
ờ
ờ
i ta
i ta
s
s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng phương ph

ng phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký đ
c ký đ
ể
ể
t
t
á
á
ch c
ch c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t
t
m
m
à
à
u v

u v
à
à
ch
ch
ỉ
ỉ
sau n
sau n
à
à
y ngư
y ngư
ờ
ờ
i ta
i ta
á
á
p d
p d
ụ
ụ
ng cho vi
ng cho vi
ệ
ệ
c
c
t

t
á
á
ch c
ch c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t không m
t không m
à
à
u.
u.
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
13
13
S

S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel còn đư
c gel còn đư
ợ
ợ
c g
c g
ọ
ọ
i l
i l
à
à
phương ph
phương ph
á
á
p d
p d
ù
ù
ng ch
ng ch
ấ

ấ
t rây
t rây
phân t
phân t
ử
ử
, l
, l
ọ
ọ
c gel (
c gel (
gel filtration)
gel filtration)
Cơ s
Cơ s
ở
ở
c
c
ủ
ủ
a phương ph
a phương ph
á
á
p l
p l
ọ

ọ
c gel l
c gel l
à
à
d
d
ự
ự
a v
a v
à
à
o s
o s
ự
ự
kh
kh
á
á
c nhau
c nhau
nhau v
nhau v
ề
ề
k
k
í

í
ch thư
ch thư
ớ
ớ
c, h
c, h
ì
ì
nh d
nh d
ạ
ạ
ng v
ng v
à
à
phân t
phân t
ử
ử
lư
lư
ợ
ợ
ng c
ng c
ủ
ủ
a

a
protein enzyme c
protein enzyme c
ó
ó
trong h
trong h
ỗ
ỗ
n h
n h
ợ
ợ
p đ
p đ
ể
ể
t
t
á
á
ch ch
ch ch
ú
ú
ng ra.
ng ra.
Đ
Đ
ể

ể
đ
đ
ả
ả
m b
m b
ả
ả
o cho vi
o cho vi
ệ
ệ
c t
c t
á
á
ch protein enzyme đư
ch protein enzyme đư
ợ
ợ
c t
c t
ố
ố
t, ch
t, ch
ấ
ấ
t

t
rây phân t
rây phân t
ử
ử
ph
ph
ả
ả
i l
i l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t trơ
t trơ
, không ph
, không ph
ả
ả
n
n
ứ
ứ
ng v
ng v
ớ

ớ
i protein
i protein
enzyme. Ch
enzyme. Ch
ấ
ấ
t n
t n
à
à
y c
y c
ũ
ũ
ng không hòa tan v
ng không hòa tan v
à
à
tương đ
tương đ
ố
ố
i b
i b
ề
ề
n
n
v

v
ớ
ớ
i c
i c
á
á
c y
c y
ế
ế
u t
u t
ố
ố
v
v
ề
ề
cơ h
cơ h
ọ
ọ
c c
c c
ũ
ũ
ng như sinh h
ng như sinh h
ọ

ọ
c. Ngo
c. Ngo
à
à
i ra ch
i ra ch
ấ
ấ
t
t
đư
đư
ợ
ợ
c s
c s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng cho m
ng cho m
ụ
ụ
c đ
c đ
í

í
ch l
ch l
ọ
ọ
c phân t
c phân t
ử
ử
ph
ph
ả
ả
i l
i l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t không
t không
c
c
ó
ó
t
t
í

í
nh đ
nh đ
à
à
n h
n h
ồ
ồ
i (không co) v
i (không co) v
à
à
ph
ph
ả
ả
i l
i l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t ưa nư
t ưa nư
ớ
ớ
c

c
(hidrofil).
(hidrofil).
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
14
14
Gel sephadex l
Gel sephadex l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t th
t th
ỏ
ỏ
a mãn c
a mãn c
á

á
c y
c y
ế
ế
u t
u t
ố
ố
trên.
trên.
Sephadex
Sephadex
l
l
à
à
ch
ch
ế
ế
ph
ph
ẩ
ẩ
m dextran do c
m dextran do c
á
á
c lo

c lo
à
à
i vi sinh v
i vi sinh v
ậ
ậ
t
t
kh
kh
á
á
c nhau l
c nhau l
à
à
Leuconostoc
Leuconostoc
t
t
ạ
ạ
o ra khi ch
o ra khi ch
ú
ú
ng đư
ng đư
ợ

ợ
c nuôi c
c nuôi c
ấ
ấ
y
y
trên môi trư
trên môi trư
ờ
ờ
ng ch
ng ch
ứ
ứ
a saccharose. Tr
a saccharose. Tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
c
c
ủ

ủ
a dextran c
a dextran c
ó
ó
th
th
ể
ể
đ
đ
ạ
ạ
t t
t t
ớ
ớ
i h
i h
à
à
ng tri
ng tri
ệ
ệ
u v
u v
à
à
l

l
ớ
ớ
n hơn
n hơn
. Phân t
. Phân t
ử
ử
dextran bao g
dextran bao g
ồ
ồ
m c
m c
á
á
c chu
c chu
ỗ
ỗ
i do c
i do c
á
á
c g
c g
ố
ố
c glucose t

c glucose t
ạ
ạ
o th
o th
à
à
nh
nh
c
c
á
á
c liên k
c liên k
ế
ế
t 1,6. Sephadex Nh
t 1,6. Sephadex Nh
ậ
ậ
n t
n t
ừ
ừ
dextran b
dextran b
ằ
ằ
ng c

ng c
á
á
ch x
ch x
ử
ử
lý h
lý h
ó
ó
a h
a h
ọ
ọ
c (do t
c (do t
á
á
c d
c d
ụ
ụ
ng c
ng c
ủ
ủ
a epichlohidrin)
a epichlohidrin)
đ

đ
ể
ể
t
t
ạ
ạ
o ra c
o ra c
á
á
c
c
lư
lư
ớ
ớ
i phân nh
i phân nh
á
á
nh c
nh c
ó
ó
liên k
liên k
ế
ế
t ngang g

t ngang g
ọ
ọ
i l
i l
à
à
"s
"s
à
à
ng phân t
ng phân t
ử
ử
" v
" v
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t n
t n
à
à
y tr
y tr
ở

ở
th
th
à
à
nh không tan trong nư
nh không tan trong nư
ớ
ớ
c. S
c. S
ố
ố
liên k
liên k
ế
ế
t
t
ngang t
ngang t
ạ
ạ
o ra c
o ra c
à
à
ng nhi
ng nhi
ề

ề
u, k
u, k
í
í
ch thư
ch thư
ớ
ớ
c c
c c
ủ
ủ
a l
a l
ỗ
ỗ
s
s
à
à
ng phân t
ng phân t
ử
ử
c
c
à
à
ng nh

ng nh
ỏ
ỏ
.
.
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
15
15
Phương ph
Phương ph
á
á
p l
p l
ọ
ọ
c phân t
c phân t
ử
ử
trên Sephadex đư

trên Sephadex đư
ợ
ợ
c ti
c ti
ế
ế
n h
n h
à
à
nh
nh
như sau
như sau
: cho sephadex v
: cho sephadex v
à
à
o c
o c
ộ
ộ
t th
t th
ủ
ủ
y tinh d
y tinh d
à

à
i v
i v
à
à
cân b
cân b
ằ
ằ
ng
ng
b
b
ằ
ằ
ng dung d
ng dung d
ị
ị
ch đ
ch đ
ệ
ệ
m c
m c
ó
ó
pH nh
pH nh
ấ

ấ
t đ
t đ
ị
ị
nh. S
nh. S
au đ
au đ
ó
ó
cho dung
cho dung
d
d
ị
ị
ch protein enzyme lên c
ch protein enzyme lên c
ộ
ộ
t. Khi l
t. Khi l
ọ
ọ
c v
c v
à
à
chi

chi
ế
ế
t b
t b
ằ
ằ
ng dung
ng dung
môi th
môi th
í
í
ch h
ch h
ợ
ợ
p, c
p, c
á
á
c phân t
c phân t
ử
ử
c
c
ó
ó
tr

tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
nh
nh
ỏ
ỏ
(
(
ở
ở


đây l
đây l
à
à
c
c
á
á
c mu

c mu
ố
ố
i) s
i) s
ẽ
ẽ
khu
khu
ế
ế
ch t
ch t
á
á
n ch
n ch
ậ
ậ
m ch
m ch
ạ
ạ
p qua c
p qua c
á
á
c
c
l

l
ỗ
ỗ
nh
nh
ỏ
ỏ
c
c
ủ
ủ
a c
a c
á
á
c h
c h
ạ
ạ
t Sephadex b
t Sephadex b
ị
ị
trương ph
trương ph
ồ
ồ
ng, còn ch
ng, còn ch
ấ

ấ
t
t
c
c
ó
ó
tr
tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
l
l
ớ
ớ
n hơn
n hơn
(
(
ở
ở
trư

trư
ờ
ờ
ng h
ng h
ợ
ợ
p n
p n
à
à
y l
y l
à
à
protein enzyme) không c
protein enzyme) không c
ó
ó
kh
kh
ả
ả
năng đi v
năng đi v
à
à
o m
o m
à

à
l
l
á
á
ch nhanh
ch nhanh
qua c
qua c
á
á
c h
c h
ạ
ạ
t sephadex v
t sephadex v
à
à
s
s
ẽ
ẽ
đư
đư
ợ
ợ
c chi
c chi
ế

ế
t nhanh ra kh
t nhanh ra kh
ỏ
ỏ
i c
i c
ộ
ộ
t
t
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
16
16
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ

ọ
c gel
c gel
Sơ đồ của sắc ký lọc gel
Các phân tử protein phân tách theo kích thước,
các phân tử lớn hơn đi qua cột tự do hơn và
xuất hiện trong các phân đoạn đầu tiên
Các hạt polymer
xốp có lỗ nhỏ
Hỗn hợp protein được bổ sung vào cột
chứa các polymer liên kết chéo
17
17
V
V
ì
ì
v
v
ậ
ậ
y ta c
y ta c
ó
ó
th
th
ể
ể
t

t
á
á
ch đư
ch đư
ợ
ợ
c ch
c ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
tr
tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử


cao hơn tho

cao hơn tho
á
á
t ra kh
t ra kh
ỏ
ỏ
i c
i c
ộ
ộ
t gel trư
t gel trư
ớ
ớ
c so v
c so v
ớ
ớ
i ch
i ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
phân t
phân t
ử

ử


lư
lư
ợ
ợ
ng nh
ng nh
ỏ
ỏ
. Hãng Sephadex (Pharmacia) c
. Hãng Sephadex (Pharmacia) c
ủ
ủ
a Th
a Th
ụ
ụ
y Đi
y Đi
ể
ể
n
n
đã tung ra th
đã tung ra th
ị
ị
trư

trư
ờ
ờ
ng c
ng c
á
á
c lo
c lo
ạ
ạ
i sephadex c
i sephadex c
ó
ó
k
k
í
í
ch thư
ch thư
ớ
ớ
c
c
kh
kh
á
á
c nhau c

c nhau c
ó
ó
ký hi
ký hi
ệ
ệ
u t
u t
ừ
ừ
G
G
10
10
đ
đ
ế
ế
n G200. S
n G200. S
ố
ố
ký hi
ký hi
ệ
ệ
u đ
u đ
ể

ể
ch
ch
ỉ
ỉ
ra m
ra m
ứ
ứ
c đ
c đ
ộ
ộ
nh
nh
ậ
ậ
n (h
n (h
ú
ú
t)
t)
nư
nư
ớ
ớ
c c
c c
ủ

ủ
a ch
a ch
ú
ú
ng. V
ng. V
í
í
d
d
ụ
ụ
G
G
10
10
đ
đ
ể
ể
ch
ch
ỉ
ỉ


khi trương ph
khi trương ph
ồ

ồ
ng th
ng th
ì
ì
1g gel khô nh
1g gel khô nh
ậ
ậ
n 1
n 1
ml nư
ml nư
ớ
ớ
c (1ml/g)
c (1ml/g)
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
18
18
C

C
á
á
c lo
c lo
ạ
ạ
i sephadex
i sephadex
Tr
Tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
G. 10
G. 10
0
0
-
-
700
700
G. 15

G. 15
0
0
-
-
1.50
1.50
G. 25
G. 25
100
100
–
–
5000
5000
h
h
ạ
ạ
t tinh (F)
t tinh (F)
h
h
ạ
ạ
t thô (C)
t thô (C)
G. 50
G. 50
1500

1500
-
-
30.000
30.000
h
h
ạ
ạ
t tinh (F)
t tinh (F)
h
h
ạ
ạ
t thô (C)
t thô (C)
G. 75
G. 75
3.000
3.000
-
-
70.000
70.000
G. 100
G. 100
4.000
4.000
-

-
150.000
150.000
G. 150
G. 150
5.000
5.000
-
-
400.000
400.000
G. 200
G. 200
5.000
5.000
-
-
800.000
800.000
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
19

19
C
C
á
á
c gel l
c gel l
ọ
ọ
c phân t
c phân t
ử
ử
đư
đư
ợ
ợ
c s
c s
ả
ả
n xu
n xu
ấ
ấ
t trong 4 c
t trong 4 c
ỡ
ỡ
h

h
ạ
ạ
t c
t c
ù
ù
ng
ng
trong m
trong m
ộ
ộ
t vòng l
t vòng l
ọ
ọ
c phân t
c phân t
ử
ử
: h
: h
ạ
ạ
t thô (coarse), h
t thô (coarse), h
ạ
ạ
t trung

t trung
b
b
ì
ì
nh (medium), h
nh (medium), h
ạ
ạ
t m
t m
ị
ị
n (fine), h
n (fine), h
ạ
ạ
t siêu m
t siêu m
ị
ị
n, r
n, r
ấ
ấ
t m
t m
ị
ị
n

n
(superfine).
(superfine).
Ngư
Ngư
ờ
ờ
i ta còn s
i ta còn s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng sephadex đ
ng sephadex đ
ể
ể
lo
lo
ạ
ạ
i mu
i mu
ố
ố
i thay cho qu
i thay cho qu
á

á
tr
tr
ì
ì
nh th
nh th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch. C
ch. C
ù
ù
ng nh
ng nh
ó
ó
m ch
m ch
ấ
ấ
t rây phân t
t rây phân t
ử
ử
c

c
ó
ó
ngu
ngu
ồ
ồ
n g
n g
ố
ố
c
c
polisacharid, l
polisacharid, l
à
à
ch
ch
ế
ế
ph
ph
ẩ
ẩ
m dextran như sephadex
m dextran như sephadex
(pharmacia) còn c
(pharmacia) còn c
ó

ó
molselect (Reanal)
molselect (Reanal)
-
-
l
l
à
à
s
s
ả
ả
n ph
n ph
ẩ
ẩ
m c
m c
ủ
ủ
a
a
Hungary đư
Hungary đư
ợ
ợ
c
c
ứ

ứ
ng d
ng d
ụ
ụ
ng nhi
ng nhi
ề
ề
u trong nghiên c
u trong nghiên c
ứ
ứ
u.
u.
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
20
20
C
C
ó

ó
th
th
ể
ể
d
d
ù
ù
ng đ
ng đ
ể
ể
l
l
à
à
m cô đ
m cô đ
ặ
ặ
c c
c c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t c

t c
ó
ó
tr
tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
l
l
ớ
ớ
n như protein
n như protein
, peptid, lo
, peptid, lo
ạ
ạ
i mu
i mu
ố
ố
i kh

i kh
ỏ
ỏ
i protein enzyme (d
i protein enzyme (d
ù
ù
ng
ng
nhanh hơn so v
nhanh hơn so v
ớ
ớ
i th
i th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch), l
ch), l
ọ
ọ
c gel t
c gel t
á
á
ch theo tr

ch theo tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng
ng
phân t
phân t
ử
ử
(
(
như protein huy
như protein huy
ế
ế
t thanh)
t thanh)
ho
ho
ặ
ặ
c t
c t
á
á
ch c

ch c
á
á
c s
c s
ả
ả
n ph
n ph
ẩ
ẩ
m protein đư
m protein đư
ợ
ợ
c h
c h
ì
ì
nh th
nh th
à
à
nh dư
nh dư
ớ
ớ
i t
i t
á

á
c
c
d
d
ụ
ụ
ng c
ng c
ủ
ủ
a enzyme phân c
a enzyme phân c
ắ
ắ
t (
t (
như
như
-
-
G
G
-
-
globulin b
globulin b
ị
ị
c

c
ắ
ắ
t b
t b
ở
ở
i
i
papain). Ngo
papain). Ngo
à
à
i nh
i nh
ó
ó
m ch
m ch
ấ
ấ
t rây phân t
t rây phân t
ử
ử
l
l
à
à
ch

ch
ế
ế
ph
ph
ẩ
ẩ
m dextran
m dextran
còn c
còn c
ó
ó
nh
nh
ó
ó
m ch
m ch
ấ
ấ
t rây phân t
t rây phân t
ử
ử
l
l
à
à
ch

ch
ế
ế
ph
ph
ẩ
ẩ
m gel acrilamid bao
m gel acrilamid bao
g
g
ồ
ồ
m Biogel (Bio
m Biogel (Bio
-
-
Rad) v
Rad) v
à
à
Acrilex (Reanal). Acrilex gel l
Acrilex (Reanal). Acrilex gel l
à
à
lo
lo
ạ
ạ
i

i
copolimer, s
copolimer, s
ả
ả
n ph
n ph
ẩ
ẩ
m c
m c
ủ
ủ
a Hungary đư
a Hungary đư
ợ
ợ
c t
c t
ạ
ạ
o ra t
o ra t
ừ
ừ
acrilamid
acrilamid
v
v
à

à
N, N'
N, N'
-
-
metilen bisacrilamid. C
metilen bisacrilamid. C
á
á
c acrilex gel c
c acrilex gel c
ó
ó
ký hi
ký hi
ệ
ệ
u t
u t
ừ
ừ
P
P
-
-
300 d
300 d
ù
ù
ng đ

ng đ
ể
ể
t
t
á
á
ch c
ch c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
tr
tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử

ử
trong
trong
ngư
ngư
ỡ
ỡ
ng t
ng t
ừ
ừ
100
100
-
-
đ
đ
ế
ế
n 300.000. C
n 300.000. C
ó
ó
th
th
ể
ể
s
s
ử

ử
d
d
ụ
ụ
ng
ng
ở
ở
v
v
ù
ù
ng pH t
ng pH t
ừ
ừ
2
2
-
-
11. Ch
11. Ch
ấ
ấ
t th
t th
ứ
ứ
ba l

ba l
à
à
agarose gel
agarose gel
,
,
đã lo
đã lo
ạ
ạ
i sulphate. Hay ph
i sulphate. Hay ph
ổ
ổ
bi
bi
ế
ế
n l
n l
à
à
lo
lo
ạ
ạ
i sepharose (
i sepharose (
Pharmacia). N

Pharmacia). N
gư
gư
ờ
ờ
i ta thư
i ta thư
ờ
ờ
ng d
ng d
ù
ù
ng ch
ng ch
ấ
ấ
t
t
n
n
à
à
y đ
y đ
ể
ể
t
t
á

á
ch c
ch c
á
á
c phân t
c phân t
ử
ử
c
c
ó
ó
tr
tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng l
ng l
ớ
ớ
n hơn
n hơn
106.
106.
S

S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
21
21
T
T
ó
ó
m l
m l
ạ
ạ
i b
i b
ằ
ằ
ng phương ph
ng phương ph
á
á
p l
p l
ọ

ọ
c rây phân t
c rây phân t
ử
ử
ngư
ngư
ờ
ờ
i ta th
i ta th
ể
ể
t
t
á
á
ch c
ch c
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t c
t c
ó
ó
tr

tr
ọ
ọ
ng lư
ng lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
kh
kh
á
á
c nhau c
c nhau c
ó
ó
trong h
trong h
ỗ
ỗ
n h
n h
ợ
ợ
p (
p (
như polimer

như polimer
, p
, p
olisaccharid, acid nuclei
olisaccharid, acid nuclei
c,
c,
protein). N
protein). N
gư
gư
ờ
ờ
i ta c
i ta c
ó
ó
th
th
ể
ể
d
d
ù
ù
ng k
ng k
ỹ
ỹ
thu

thu
ậ
ậ
t n
t n
à
à
y đ
y đ
ể
ể
lo
lo
ạ
ạ
i mu
i mu
ố
ố
i
i
thay cho qu
thay cho qu
á
á
tr
tr
ì
ì
nh th

nh th
ẩ
ẩ
m t
m t
í
í
ch. V
ch. V
à
à
hơn th
hơn th
ế
ế
n
n
ữ
ữ
a, trong qu
a, trong qu
á
á
tr
tr
ì
ì
nh tinh ch
nh tinh ch
ế

ế
protein enzyme, ch
protein enzyme, ch
ú
ú
ng còn đư
ng còn đư
ợ
ợ
c s
c s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng đ
ng đ
ể
ể


cô đ
cô đ
ặ
ặ
c dung d
c dung d
ị

ị
ch protein enzyme.
ch protein enzyme.
S
S
ắ
ắ
c ký l
c ký l
ọ
ọ
c gel
c gel
22
22
Phương ph
Phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký trao đ
c ký trao đ
ổ
ổ
i ion d
i ion d
ự

ự
a v
a v
à
à
o s
o s
ự
ự
kh
kh
á
á
c nhau v
c nhau v
ề
ề


đi
đi
ệ
ệ
n t
n t
í
í
ch t
ch t
ổ

ổ
ng s
ng s
ố
ố
c
c
ủ
ủ
a c
a c
á
á
c protein enzyme. Hay n
c protein enzyme. Hay n
ó
ó
i c
i c
á
á
ch kh
ch kh
á
á
c,
c,
phương ph
phương ph
á

á
p n
p n
à
à
y đư
y đư
ợ
ợ
c d
c d
ự
ự
a trên cơ s
a trên cơ s
ở
ở
c
c
ủ
ủ
a ph
a ph
ả
ả
n
n
ứ
ứ
ng trao đ

ng trao đ
ổ
ổ
i
i
ion gi
ion gi
ữ
ữ
a protein đư
a protein đư
ợ
ợ
c tan trong nư
c tan trong nư
ớ
ớ
c ho
c ho
ặ
ặ
c dung d
c dung d
ị
ị
ch đ
ch đ
ệ
ệ
m

m
loãng v
loãng v
à
à
c
c
á
á
c t
c t
á
á
c nhân trao đ
c nhân trao đ
ổ
ổ
i ion. T
i ion. T
á
á
c nhân (hay nguyên
c nhân (hay nguyên
li
li
ệ
ệ
u)
u)
trao đ

trao đ
ổ
ổ
i ion c
i ion c
ó
ó
th
th
ể
ể
l
l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t nh
t nh
ự
ự
a c
a c
ó
ó
t
t
í

í
ch nh
ch nh
ó
ó
m sinh ion
m sinh ion
ho
ho
ặ
ặ
c l
c l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t ionit.
t ionit.
Đây l
Đây l
à
à
nh
nh
ữ
ữ
ng ch

ng ch
ấ
ấ
t gi
t gi
á
á
trơ
trơ
, k
, k
hông tan trong
hông tan trong
nư
nư
ớ
ớ
c, c
c, c
ó
ó
b
b
ả
ả
n ch
n ch
ấ
ấ
t l

t l
à
à
cellulose ho
cellulose ho
ặ
ặ
c ch
c ch
ấ
ấ
t gel dextran c
t gel dextran c
ó
ó
lư
lư
ớ
ớ
i
i
phân nh
phân nh
á
á
nh (Sephadex, Molselect) ho
nh (Sephadex, Molselect) ho
ặ
ặ
c l

c l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t nh
t nh
ự
ự
a
a
polistirol. Ch
polistirol. Ch
ấ
ấ
t gi
t gi
á
á
th
th
ể
ể
n
n
à
à
y thư

y thư
ờ
ờ
ng k
ng k
ế
ế
t h
t h
ợ
ợ
p v
p v
ớ
ớ
i c
i c
á
á
c nh
c nh
ó
ó
m ion
m ion
h
h
ó
ó
a. C

a. C
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t trao đ
t trao đ
ổ
ổ
i ion c
i ion c
ó
ó
ch
ch
ấ
ấ
t gi
t gi
á
á
l
l
à
à
celluose
celluose
, s

, s
ephadex,
ephadex,
molselect thông thư
molselect thông thư
ờ
ờ
ng đư
ng đư
ợ
ợ
c d
c d
ù
ù
ng đ
ng đ
ể
ể
t
t
á
á
ch protein enzyme,
ch protein enzyme,
còn c
còn c
á
á
c ch

c ch
ấ
ấ
t trao đ
t trao đ
ổ
ổ
i ion c
i ion c
ó
ó
ch
ch
ấ
ấ
t gi
t gi
á
á
l
l
à
à
polistirol (v
polistirol (v
í
í
d
d
ụ

ụ
như
như
Dowex, Amberlite) ch
Dowex, Amberlite) ch
ỉ
ỉ
d
d
ù
ù
ng đ
ng đ
ể
ể
t
t
á
á
ch c
ch c
á
á
c peptid c
c peptid c
ó
ó
tr
tr
ọ

ọ
ng
ng
lư
lư
ợ
ợ
ng phân t
ng phân t
ử
ử
nh
nh
ỏ
ỏ
hơn
hơn
.
.
Phương ph
Phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký trao đ
c ký trao đ
ổ

ổ
i ion.
i ion.
23
23
* C
* C
á
á
c ch
c ch
ấ
ấ
t trao đ
t trao đ
ổ
ổ
i ion c
i ion c
ó
ó
ch
ch
ấ
ấ
t gi
t gi
á
á
cellulose

cellulose
-
-
Cationit CM
Cationit CM
-
-
cellulose (carboxylmetyl
cellulose (carboxylmetyl
-
-
cellulose)
cellulose)
-
-
l
l
à
à
m
m
ộ
ộ
t
t
d
d
ẫ
ẫ
n xu

n xu
ấ
ấ
t este c
t este c
ủ
ủ
a cellulose.
a cellulose.
(Cellelose
(Cellelose
-
-
O
O
-
-
CH2
CH2
–
–
COOH)
COOH)
Khi phân li cho ra COO
Khi phân li cho ra COO
-
-
.
.
Đây l

Đây l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t trao đ
t trao đ
ổ
ổ
i cation.
i cation.
Trên nh
Trên nh
ữ
ữ
ng cationit, th
ng cationit, th
ì
ì
c
c
á
á
c protein ki
c protein ki
ề
ề
m c

m c
ó
ó
th
th
ừ
ừ
a nh
a nh
ữ
ữ
ng
ng
nh
nh
ó
ó
m amin v
m amin v
à
à
nh
nh
ữ
ữ
ng nh
ng nh
ó
ó
m ki

m ki
ề
ề
m kh
m kh
á
á
c đư
c đư
ợ
ợ
c h
c h
ấ
ấ
p ph
p ph
ụ
ụ
(liên k
(liên k
ế
ế
t
t
ion). S
ion). S
ự
ự
h

h
ấ
ấ
p ph
p ph
ụ
ụ
trên c
trên c
á
á
c cationit đư
c cationit đư
ợ
ợ
c ti
c ti
ế
ế
n h
n h
à
à
nh v
nh v
ớ
ớ
i nh
i nh
ữ

ữ
ng
ng
dung d
dung d
ị
ị
ch loãng
ch loãng
ở
ở
pH 1,5
pH 1,5
-
-
6,5. (C
6,5. (C
á
á
c protein ki
c protein ki
ề
ề
m c
m c
ó
ó
ch
ch
ứ

ứ
a
a
c
c
á
á
c acid amin diamino
c acid amin diamino
-
-
mono carboxylic như lys
mono carboxylic như lys
, Arg, His)
, Arg, His)
Phương ph
Phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký trao đ
c ký trao đ
ổ
ổ
i ion.
i ion.
24

24
-
-
Anionit DEAE
Anionit DEAE
-
-
cellulose (diethylamino
cellulose (diethylamino
-
-
ethyl
ethyl
-
-
cellulose) l
cellulose) l
à
à
d
d
ẫ
ẫ
n xu
n xu
ấ
ấ
t este c
t este c
ủ

ủ
a cellulose)
a cellulose)
Cellulose
Cellulose
-
-
O
O
-
-
CH
CH
2
2
-
-
CH
CH
2
2
–
–
N
N
-
-
(C
(C
2

2
H
H
5
5
)2
)2
Trong H
Trong H
2
2
O n
O n
ó
ó
đư
đư
ợ
ợ
c phân ly:
c phân ly:
Cellulose
Cellulose
-
-
O
O
-
-
C

C
2
2
H
H
4
4
-
-
N
N
-
-
(C
(C
2
2
H
H
5
5
)
)
2
2
+ H
+ H
2
2
O

O
Cellulose
Cellulose
-
-
O
O
-
-
C
C
2
2
H
H
4
4
-
-
N
N
+
+
H
H
-
-
(C
(C
2

2
H
H
5
5
)
)
2
2
+ OH
+ OH
-
-
Đây l
Đây l
à
à
ch
ch
ấ
ấ
t trao đ
t trao đ
ổ
ổ
i anion, b
i anion, b
ả
ả
n thân t

n thân t
í
í
ch đi
ch đi
ệ
ệ
n dương
n dương
.
.
Phương ph
Phương ph
á
á
p s
p s
ắ
ắ
c ký trao đ
c ký trao đ
ổ
ổ
i ion.
i ion.
25
25
C
C
á

á
c anionit đư
c anionit đư
ợ
ợ
c
c
á
á
p d
p d
ụ
ụ
ng đ
ng đ
ể
ể
phân t
phân t
í
í
ch c
ch c
á
á
c protein acid c
c protein acid c
ó
ó
th

th
ừ
ừ
a nh
a nh
ữ
ữ
ng nh
ng nh
ó
ó
m carboxyl t
m carboxyl t
ự
ự
do. S
do. S
ự
ự
h
h
ấ
ấ
p ph
p ph
ụ
ụ
protein trên
protein trên
nh

nh
ữ
ữ
ng ionit như v
ng ionit như v
ậ
ậ
y đư
y đư
ợ
ợ
c ti
c ti
ế
ế
n h
n h
à
à
nh v
nh v
ớ
ớ
i nh
i nh
ữ
ữ
ng dung d
ng dung d
ị

ị
ch
ch
đ
đ
ệ
ệ
m c
m c
ó
ó
l
l
ự
ự
c ion th
c ion th
ấ
ấ
p (0,005
p (0,005
-
-
0,1M)
0,1M)
ở
ở
pH 7,5
pH 7,5
-

-
8,5. (c
8,5. (c
á
á
c
c
protein acid c
protein acid c
ó
ó
ch
ch
ứ
ứ
a c
a c
á
á
c amino acid monoamin
c amino acid monoamin
dicarboxylic như glu
dicarboxylic như glu
, Asp)
, Asp)
Phương ph
Phương ph
á
á
p s

p s
ắ
ắ
c ký trao đ
c ký trao đ
ổ
ổ
i ion.
i ion.