phân tích vi sinh thực phẩm hướng dẫn kĩ thuật elisa

MÔN:
Phân tích th c ph mự ẩ
GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ
SVTH:
Nguyễn Thị Oanh
Nguyễn Ngọc Thị
Phùng Thị Thư
Lê Thị Thuý
Trần Quốc Toàn
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP. HCM
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM
ĐỀ TÀI: HƯỚNG DẪN KĨ THUẬT
ELISA
NỘI
DUNG
ỨNG DỤNG
PHÂN LOẠI
KỸ THUẬT ELISA
HƯỚNG DẪN KỸ THUẬT ELISA
CÁC KHÁI NIỆM
LỊCH SỬ RA ĐỜI PHƯƠNG PHÁP ELISA
NỘI DUNG
Lịch sử ra đời phương pháp elisa
Kỹ thuật gắn kết enzyme với kháng nguyên
hay kháng thể được phát triển bởi Stratis
Avrameas và G.B. Pierce.
Tiếp sau đó, vào năm 1966, Wide và Porath
phát triển phương pháp gắn kháng nguyên và
kháng thể trên bề mặt rắn (bề mặt của các vi
phiếm hay các đĩa) nhờ đó mà kháng nguyên
hay kháng thể không được gắn kết sẽ dễ dàng

được rửa trôi.
Peter Perlmann và Eva Engvall (Thụy Điển)
cùng với nhóm Anton Schuurs và Bauke van
Weemen (Hà Lan) công bố phương pháp
được đặt tên ELISA (EIA) dựa trên tất cả
những bước phát triển nói trên. Phương pháp
chính thức ra đời vào năm 1971.
Các khái niệm
Phương pháp ELISA: (Enzyme Linked
Immunosorbent Assay- xét nghiệm hấp thụ
miễn dịch liên kết với enzyme) hay EIA
(Enzyme Immuno Assay): là dựa trên sự kết
hợp đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng
thể, trong đó kháng thể được gắn với một
enzyme.
Kháng thể: là các phân tử immunoglobulin (có
bản chất glycoprotein), do các tế bào lympho B cũng
như các tương bào (biệt hóa từ lympho B) tiết ra để hệ
miễn dịch nhận biết và vô hiệu hóa các tác nhân lạ,
chẳng hạn các vi khuẩn hoặc virus. Mỗi kháng thể chỉ
có thể nhận diện một epitope kháng nguyên duy nhất.
Kháng nguyên: là phân tử kích thích đáp ứng miễn
dịch của cơ thể, đặc biệt là sản xuất kháng thể. Thông
thường kháng nguyên là một protein hay một
polysaccharide, nhưng nó cũng có thể là bất cứ loại
phân tử nào, mang các phân tử hapten nhỏ và gắn với
một protein chuyên chở.
Phân
loại
Elisa trực

tiếp
Elisa gián
tiếp
Sandwich
elisa
Phản ứng
ức chế/
cạnh tranh
Phân loại
Direct ELISA (ELISA trực tiếp)
Direct ELISA: Đây là dạng đơn giản nhất của
phương pháp ELISA. Trong đó, kháng
nguyên cần phát hiện sẽ được gắn trực tiếp
lên bề mặt giá thể và sẽ được phát hiện bằng
một kháng thể duy nhất

Ưu điểm: Đơn giản nhất

Nhược điểm:
•
Độ đặc hiệu bị giới hạn
•
Phải đánh dấu cho từng kháng thể
chuyên biệt với từng đối tượng.
Sơ đồ 2.1: Tiến trình thực hiện phản ứng ELISA trực tiếp
3/8/15
ELISA gián tiếp
- Phương pháp này khác Direct ELISA ở chỗ
kháng thể bắt kháng nguyên không được gắn
enzyme mà nó là mục tiêu gắn đặc hiệu của một

kháng thể khác (kháng thể này mới là kháng thể
được gắn với enzyme).
- Ưu điểm: Kháng thể gắn enzyme có thể sử
dụng để đánh dấu cho nhiều loại kháng nguyên
nên tiện lợi và kinh tế hơn, dễ dàng thương mại
hóa.
- Nhược điểm: Độ đặc hiệu của từng kháng
huyết thanh là khác nhau. Điều này dẫn đến kết
quả khác nhau giữa các thí nghiệm
3/8/15
Tiến trình thực hiện phản ứng ELISA gián tiếp
Sandwich ELISA
•
Đây là một dạng ELISA được sử dụng
phổ biến nhất trong thực tiễn do nó
cho phản ứng mạnh và nhạy. Được gọi
là “sandwich” là do kết quả thí
nghiệm được đánh giá thông qua sự
kết hợp của hai loại kháng thể là
kháng thể bắt (capture antibodies) và
kháng thể phát hiện (detection
antibodies)
3/8/15
Phản ứng ức chế /cạnh tranh
•
Phản ứng cạnh tranh mang
nghĩa là hai chất tham gia phản
ứng cùng ái lực bắt cặp với
chất thứ ba. Phản ứng cạnh

tranh đúng đắn thì hai chất
cạnh tranh phải được đưa vào
đồng thời.
sự khác biệt giữa ức chế và cạnh tranh
Kỹ thuật elisa
Giới thiệu
IdEXX sản xuất bộ dụng cụ xét nghiệm chuẩn
đoán để phát hiện các bệnh trong động vật nhai
lại, ngựa, lợn và gia cầm.
Xét nghiệm miễn dịch enzyme (ELISA) là
một trong những nhạy cảm nhất và các công
nghệ tái sản xuất có sẵn.Những xét nghiệm là
nhanh chóng, đơn giản để thực hiện dễ dàng và
tự động
3/8/15
BỘ DỤNG CỤ ELISA
•
Một bộ ELISA là một tập hợp các chất
phản ứng được tiêu chuẩn hóa và
microwell tấm sản xuất cho một thử
nghiệm cụ thể.
•
IdEXX ELISA bộ dụng cụ có thể chứa
một số hoặc tất cả các thành phần sau:
Các tấm phủ (tấm rắn/ hoặc dải), pha
loãng mẫu, điều khiển, rửa tập trung, liên
hợp, bề mặt và ngăn chặn giải pháp.
Bộ dụng cụ IDEXX được sản xuất theo
từng lô, mỗi lô Đều phải tuân theo tiêu
chuẩn, chất lượng nghiêm ngặt. Mỗi thành

phần hoặc thuốc thử trong rất nhiều bộ
được tối ưu hóa để làm việc với các hóa
chất khác có trong bộ này, bao gồm: dụng
cụ để đo độ nhạy, độ đặc hiệu và lặp lại.

Vì vậy, điều quan trọng là không để pha
trộn chất phản ứng từ rất nhiều bộ khác
nhau
3/8/15
BỘ DỤNG CỤ ELISA BAO GỒM

Tấm (đĩa) tráng

Pha loãng mẫu

Hợp lại (kết hợp, phối trộn)

Chất nền

Rửa Tập trung

Giải pháp ngăn chặn
Thiết bị kỹ thuật ELISA
- Thiết bị để thử nghiệm ELISA
được sử dụng phổ biến rộng rãi.
- Dưới đây là một phác thảo ngắn
gọn về một số thiết bị có sẵn để
thực hiện các thử nghiệm ELISA.
ống hút đơn kênh, ống hút
đa kênh

Dilutors
Hệ thống rưả trôi
Máy ELISA đọc tấm
Thiết bị bảo dưỡng và hiệu chuẩn
Việc duy trì và hiệu chuẩn thiết bị cho thí
nghiệm của bạn là cực kỳ quan trọng trong
việc cho ra kết quả chính xác, đưa vào
trong sản xuất. Bảo trì và hiệu chuẩn Lịch
trình dựa theo.
Thiết bị khi vận hành phải Luôn phải
tuân thủ theo hướng dẫn, khuyến nghị của
nhà sản xuất