Góp phân nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ streptomyces 166.28

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.76 MB, 56 trang )

BÔ
̣
Y TÊ
́

TRƢƠ
̀
NG ĐA
̣
I HO
̣
C DƢƠ
̣
C HA
̀
NÔ
̣
I

SOUTTHIDA VONGSAVATH

GÓP PHẦN NGHIÊN CƢ
́
U LÊN MEN TÔ
̉
NG
HƠ
̣

P KHA
́
NG SINH NHƠ
̀
STREPTOMYCES
166.28

KHA LUN TT NGHIP DƢC S

H NI - 2013
B Y TÊ
TRƢƠ
̀
NG ĐA
̣
I HO
̣
C DƢƠ
̣
C HA
̀
NÔ
̣
I

SOUTTHIDA VONGSAVATH

GP PHẦN NGHIÊN CƢ
́
U LÊN MEN TÔ
̉
NG
HƠ
̣
P KHA
́
NG SINH NHƠ
̀
STREPTOMYCES
166.28

KHA LUN TT NGHIP DƢC S

Ngƣơ
̀
i hƣơ
́
ng dâ
̃
n:
PGS – TS. Cao Văn Thu
Nơi thƣ
̣
c hiê

̣
n:
Bô
̣
môn Vi sinh - Sinh ho
̣
c
Trươ
̀
ng Đại học Dươ
̣
c Ha
̀
Nô
̣
i

H NI - 2013
MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1
CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 2
 2
  2
 2
 3
 3
 4
 5

 5
 6
 8
 9
 9
  9
 9
 10
 10
 10
 12
 12
1.6.2  12
 13
 -VIS) 13
 13
MS) 13
 13
13
Streptomyces sp.  
Streptomyces Orientalis 4912 sinh
vancomycin 
CHƢƠNG II : ĐI TƢNG V PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15
 15
 15
 15
 15
2.1.4 Dung môi. 17
 18
 18

 19
 19
 19
 19
 19
 20
 21
 21
 23
 23
 24
 24
 25
 26
 26
CHƢƠNG III : KẾT QUẢ THỰC NGHIM V NHÂN XÉT 27
3.1 Kết quả sàng lọc ngẫu nhiên 27
 28
 29
 30
  31
 32
 33
 33
 37
KẾT LUN V KIẾN NGHỊ 39

LỜI CẢM ƠN

 -TS
 - B  




















 .
Tôi xin chân thành  ,  ,  ,







 - 

, 








,  - 


gi.






































































.
 , 











.











. 














 , 
.




!

,  15  5 .
Sinh viên

Soutthida Vongsavath

DANH MỤC CÁC KÝ HIU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

ADN Acid - deoxyribonucleic
ARN Acid ribonucleic
ATCC American Type Culture Collection
DM Dung môi
 
 
Gr(+) 
Gr(-) Gram âm
HTKS 
ISP International Streptomyces Project



KS Kháng sinh
MT 
MTdt  

MC 
SLNN 


VSV 


DANH MỤC CÁC BẢNG

2.
2.
2.


 3.3




 

: 





Hình 1.1
Hình 1.2: K
Hình 1.3: S
Hình 1.4
Hình 1.5: 
Hình 1.6: 
Hình P.1
Hình P.3: 
Hình P.3
Hính P.4
Hính P.5
Hình P.6 
Hình P.7

1

ĐẶT VẤN ĐỀ




, 
 .
T 

   
WHO ) .
 



Streptomyces 

55% Streptomyces.

Streptomyces 

 
Streptomyces 166.28.
  .
 

2

CHƢƠNG I: TỔNG QUAN

1.1 Đại cƣơng về kháng sinh

1.1.1 Lich sử nghiên cứu kháng sinh
             nh là
Alexander Fleming  nhà si
vào tháng 10-1928 .[17]


  

 [17]
-kháng
              

 

[8]

1.1.2 Định nghĩa kháng sinh
cón n



[9,15]

3

1.1.3 Phân loại kháng sinh

[15]
 kháng sinh thành các
 
- -lactam (penicillin, cephalosporin)
- 
- 
- tetracyclin)
- Các kháng sinh polypeptid (polymyxin, bacitracin)
- Các kháng sinh macrolid (erythromycin, spiramycin)
- Các kháng sinh polyen (nystatin, amphotericin B)
- Các kháng sinh nhóm antracyclin 
- Các kháng sinh nhóm actinomycin 
- [9,16]

1.1.4 Cơ chế tác dụng của kháng sinh



[15]
- 
- 
- 
- 
- 

- [16]
4

Hình 1.1: Sơ đồ cơ chế tác dụng của kháng sinh
1.1.5 Các ứng dụng của kháng sinh
+ 

 [15]
+ 
                
            

 [15]
 
[15]
  
 [15]

5

1.2 Đại cƣơng về xạ khuẩn

am



[15]


                
hác.[15]

1.2.1 Đặc điểm hình thái của xạ khuẩn:
- 

 
[5] (Hình 2)

Hình 1.2 : khuẩn lạc xạ khuẩn
6

- --
  
            ,    
[5]
- [15]

Hình 1.3 : sơ bộ phân loại xạ khuẩn
1.2.2 Đặc điểm của xạ khuẩn chi Streptomyces
Streptomyces 

Streptomyces.  [7]
- Đặc điểm hình thái:  
khí sinh:



[6]
Actinomycetes
VSV giống xạ khuẩn
Actinomycetales
Actinoplanaceae
Streptomycetaceae
Actinomycetaceae
…
Streptomyces
Streptoverticulum
Themostreptomyces
…
7


[6]
sóng, móc


 [20]
 

`Hình 1.4 : Các khuẩn ty ở xạ khuẩn

- Đặc điểm sinh lý: Streptomyces 
           

nitrit. Streptomyces hô 
25- -7,5.[8,19]

- Khả năng tạo sắc tố: Streptomyces 
                   
melanoid .

8

1.3 Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh
 [4,9]

, ly tâm






Cô, 













Hình 1.5: Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh















Lên  








9

1.4 Tuyển chọn, cải tạo và bảo quản giống của xạ khuẩn
1.4.1. Chọn lọc ngẫu nhiên

-
[9]

1.4.2. Đột biến cải tạo giống


[9]
C:
 -guanidine, HNO
2

 V, 
 

  n , phage Mu v v















 , 



. Trong




 














 (


), (

). 
















. [12]

1.4.3 Bảo quản giống
 
[13] 
              
-6
[14]

10

1.5 Lên men tổng hợp kháng sinh
1.5.1 Đại cƣơng .
Lên men là quá trình 

lên men  [9] 

 pha [15]

 [15]

Hình 1.6 : Đƣờng cong sinh trƣởng phát triển của xạ khuẩn

1.5.2 Các phƣơng pháp lên men
 


 [4]
11



 Lên men chìm.

 . [4]



. [13]

 [13]
 
  trong bình lên men

[4]


 [4]
+ Lên men liên 

  [4]


 [4]

12

1.6 Chiết tách và tinh chế kháng sinh từ dịch lên men
1.6.1 Vai trò của chiết tách và tinh chế kháng sinh
 
              

 
 [9]

1.6.2 Các phƣơng pháp chiết tách
- Lọc: là 


 [1]
- Ly tâm: 
là tác [1]
- Chiết bằng dung môi hữu cơ: 
 [11]
- Các phương pháp sắc ký:




f
. [2]
 


 [11]

13

1.7 Bƣớc đầu nghiên cứu cấu trúc kháng sinh
1.7.1 phổ tử ngoại – khả kiến ( UV-VIS)
-VIS làm
[1] 



 . [18]
1.7.2 Quang phổ hồng ngoại (IR)


 [18]

 
 [18]
1.7.3 phổ khối ( MS)
 
 



 
[1]
1.8 Một số nghiên cứu liên quan .
1.8.1 Phát hiện nguồn kháng sinh tự nhiên phong phú nhờ nghiên cứu những
chất hóa học sinh ra bởi Streptomyces sp. trên ong bắp cày [21].


14


  
Hymenoptera. 
adison   
Sceliphron caementarium và Chalybion californium.  

chi Streptomyces . 

vàng     



 

1.8.2 Tối ƣu hóa môi trƣờng lên men chủng Streptomyces Orientalis 4912 sinh
vancomycin [20]
Streptomyces Orientalis theo


Streptomyces Orientalis Streptomyces
Orientalis 

o



 lên men 




15

CHƢƠNG II : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nuyên liệu và thiết bị
2.1.1 Chủng xạ khuẩn
 Streptomyces            
 i sinh  S


2.1.2 Ví sinh vật kiểm định

  Sinh 

Bacillus cereus ATCC 9946
-) : Shighella flexneri DT 112.

2.1.3 Các môi trƣờng
 

Bảng 2.1: Môi trƣờng nuôi cấy VSV kiểm định

NaCl

Pepton


(ml)
pH
%
%
%
%
MT canh thang
0,5
0,3
0,5
0
100
7,0-7,4

0,5

0,3
0,5
1,8

Chú ý
118-120°C trong 30 phút
16

 

Bảng 2.2: Các môi trƣờng nuôi cấy xạ khuẩn


MT1
MT2
MT3

g
2
2

Lactose
g

3,0
Glucose
g