Bài thuyết trình Phân tích vi sinh thực phẩm: Quy trình định lượng Clostridium perfringenes

BỘ CÔNG THƯƠNG 
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM
ĐỀ TÀI: QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG Clostridium perfringenes 
GVHD: Phan Thị Kim Liên
Tiết 3­4, Thứ 5
Nhóm 13


Danh sách nhóm
STT

Họ và tên

MSSV

1

Hứa Nhật Cường

2006140029

2

Nguyễn Hoàng Huân

2006140118

3

Huỳnh Thị Huyền Trâm

2006140352

4

Mai Thị Hoài Thu

2005140563

5

Đoàn Thị Cẩm Tú

2006140378


NỘI DUNG


1. Tổng quan về Clostridium perfringenes (C. Perfingenes)



Đặc điểm vi khuẩn C. perfringenes:


-

-

C. perfringenes có thể sống sót ở 
điều kiện khắc nghiệt nhờ biến 
đổi thích nghi của hệ thồng biến 
dưỡng tế bào với khả năng chịu 
đựng cao và sản sinh nội bào tử.
Các  chủng  C.  perfringenes  gặp 
phổ  biến  trong  đường  tiêu  hóa 
của người nên dùng làm VSV chỉ 
thị về khả năng nhiễm phân.


2. Nguyên tắc định lượng


3. Dụng cụ, thiết bị, môi trường và hóa chất
v Thiết bị và dụng cụ:

− Cân, dao lấy mẫu, pH kế.
− Bể điều nhiệt, que cấy thẳng, que cấy vòng.
− Nồi triệt trùng, phiến kính,  lam kính.
− Tủ ấm, ống nghiệm, pipet.
− Tủ cấy, hộp petri.


v

Môi trường và hóa chất
Môi trường và hóa chất

SPW
TSC agar base
D­xycloserin
Thioglycolat lỏng
LS (lactose sunfit)
Nitrat (thử di động)
Lactose­gelatin
HCl và NaOH 10%

Mục đích
Pha loãng mẫu
Nuôi cấy C. perfringenes

Khẳng định C. perfringenes
Chỉnh pH


4. Quy trình thực hiện
Sản phẩm dạng lỏng

02 đĩa 
petri
15-20mL

TSC

02 đĩa 
petri
15-20mL

Sản phẩm dạng khác
10g mẫu+90mL SPW

02 đĩa 
petri
15-20mL

Đọc kết quả Clotridium perfringenes

TSC

02 đĩa 
petri
15-20mL


5. Các bước thực hiện


Bước 1: Chuẩn bị mẫu và huyền phù ban đầu

Cân 10g mẫu 
(rắn), hoặc 
10mL mẫu 
(lỏng)

Bình 
tam giác

Dung dịch pha 

loãng SPW 
90mL

Đồng nhất mẫu và dịch pha loãng SPW trong máy dập mẫu 
trong 1 phút hoặc lắc đều bình tam giác có mẫu và dịch pha 
loãng trong 2­3 phút


Bước 2: Pha loãng mẫu

pipet

1mL

Dd 
huyền 
phù

9mL 
dịch 
pha 
loãng 
SPW

Trộn kỹ bằng máy vortex 
trong 5­10s


Bước 3: Cấy và ủ mẫu

Bước 4: Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định
v Đếm khuẩn lạc:
− Đếm  các  đĩa  có  số  khuẩn  lạc 
dưới 150 sau 24h nuôi cấy.
− Khuẩn lạc  C. perfringenes điển 
hình  có  màu  đen  trên  môi 
trường TSC.
− Đếm khuẩn lạc  C. perfringenes 
trên  những  đĩa  có  số  đếm  phù 
hợp.


Chọn 5 khuẩn lạc điển hình và chọn một trong hai kỹ thuật 
sau:



Kết quả:
vĐối với kỹ thuật 1: vi khuẩn hình thành các khuẩn lạc điển hình 
trên  môi  trường  thạch  TSC  và  được  khẳng  định  dương  tính  với  môi 
trường LS được coi là C. perfingenes.
vĐối  với  kỹ  thuật  2:  các  vi  khuẩn  sinh  ra  các  khuẩn  lạc  màu  đen 
trong môi trường TSC mà không di động, thường khử nitrat thành nitrit, 
sinh  acid  và  sinh  khí  từ  lactoza  và  hóa  lỏng  gelatin  được  gọi  là  C. 
perfringenes.


Clostridium perfringenes trong 1g/1mL mẫu (X) được tính 
theo công thức:

6. Ví dụ:


CÁM ƠN Cô vÀ CÁC BẠN Đà
LẮNG NGHE