Báo cáo khóa luận tốt nghiệp: Bước đầu nghiên cứu nuôi cấy chủng Lactobacillus acidophilus trên môi trường bán rắn

TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT
KHOA  SINH HỌC

   
BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHÓA 32

ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY 
CHỦNG LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS TRÊN MÔI 
TRƯỜNG BÁN RẮN

GVHD:    Ths. Hoàng Việt Hậu
SVTH:     Nguyễn Thị Phương Thủy


Mục tiêu đề tài 
Xác định hàm lượng sinh khối L. acidophilus thu 
được khi lên men trên môi trường MRS bán rắn, so 
sánh với lên men trên môi trường MRS rắn thông 
thường.


ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
Chủng Lactobacillus acidophilus.
•

 Nguồn: viện Human Hungary

•

 Được cung cấp từ phòng công 
nghệ vi sinh trường Đại học 

Đà Lạt.


BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM 
  NGHIỆM THỨC 1: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi  nuôi 
cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 5 (g/l).
 
  NGHIỆM THỨC 2: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi  nuôi 
cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 6 (g/l).

  NGHIỆM THỨC 3: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi  nuôi 
cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 7 (g/l).

 NGHIỆM THỨC 4: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi  nuôi 
cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 8 (g/l).

 NGHIỆM THỨC 5: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi 
cấy trên môi trường rắn với hàm lượng agar 16 (g/l).


CHỦNG GIỐNG
PHỤC HỒI GIỐNG
CẤY PHÂN VÙNG
NHÂN GIỐNG CẤP 1

QUY 
TRÌNH 
THỰC 
HIỆN

KIỂM TRA GIỐNG
LÊN MEN BỀỀ M
 MẶ
ẶTT
LÊN MEN B
THU SINH KHỐI TẾ BÀO
CỐ ĐỊNH SINH KHỐI TẾ BÀO
SẤY VÀ XAY SINH KHỐI SAU CỐ ĐỊNH
KIỂM TRA MẬT ĐỘ VÀ HÌNH THÁI TẾ BÀO 
L. ACIDOPHILUS CỦA SẢN PHẨM.


VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

VẬT LIỆU
•

 Môi trường MRS ở 
các nghiệm thức agar 
khác nhau.

PHƯƠNG PHÁP
•
•
•
•
•
•
•

 Phục hồi giống
 Cấy phân vùng
 Nhân giống cấp 1
 Lên men bề mặt
 Thu và cố định sinh khối tế bào
 Sấy và xay sau cố định.
 Kiểm tra mật độ và hình thái tế bào.


      Hình 3.1. Kết quả phục hồi L. acidophilus


Hình 3.2. Kết quả cấy phân vùng L. 
acidophilus
  


Hình 3.3. MRS lỏng 
trước nhân giống

 

Hình 3.4. Kết quả nhân giống cấp 
1
 L. acidophilus


Kết quả kiểm tra mật độ tế bào L. acidophilus 
trước lên men
 4.65*109       CFU/ml

  107CFU/ml.


Hình 3.5. Hình thái khuẩn lạc L. acidophilus


Hình 3.6. Hình thái tế bào  L. acidophilus.


Hình 3.7. Kết quả  lên men L. acidophilus trên môi trường bán 
rắn


Hình 3.7. Kết quả lên men L. acidophilus trên môi trường bán 
rắn


Hình 3.8. Kết quả lên men L. acidophilus trên môi trường rắn



Hình 3.9. Sinh khối L. acidophilus được cố 
định trên bột mì.


Hình 3.10. Sinh khối L. acidophilus đã được cố 
định và sấy.

Hình 3.11. Chế phẩm L. acidophilus sau khi xay 


Bảng 3.1. Khối lượng sản phẩm đạt được ở các nghiệm 
thức
NGHIỆM 
THỨC

LẦN 1
(g)

LẦN 2
(g)

LẦN 3
(g)

TRUNG BÌNH
(g)

Nghiệm thức 1
( agar: 5 g/l )

750

768

762

760

Nghiệm thức  2
( agar: 6 g/l )

755

764

766

761.7

Nghiệm thức 3
( agar: 7 g/l )

760

765

765

763.3

Nghiệm thức 4
( agar: 8 g/l )

765

763

767

765

Nghiệm thức 5
( agar: 16 g/l)

750

752

758

753.3


 Bảng 3.2. Mật độ tế bào L. acidophilus nuôi cấy ở các nồng 

độ agar: 5, 6, 7, 8, 16 (g/l).

Định lượng mật độ tế bào sau khi cố 
định
Hàm lượng agar(g/l)

BÁN RẮN

RẮN

Kết quả 
trung bình 

(CFU/g)

Lần 1
(CFU/g)

Lần 2
(CFU/g)

Lần 3
(CFU/g)

5

3.36*1010

3.89*1010

4.31*1010

3.79*1010

6

5.77*1010

5.84*1010

5.26*1010

5.62*1010

7

2.23*1011

3.27*1011

4.18*1011

3.23*1011

8

3.25*1011

3.71*1011

3.52*1011

3.49*1011

16

3.42*1011

3.28*1011

4.45*1011

3.72*1011

Bảng 3.3. Kết quả mật độ tế bào L. acidophilus trên một 
ml môi trường nuôi cấy. 
Khối lượng 
 Nghiệm thức
sản 
phẩm(g)

CFU/g 
sản 

Tổng thể tích môi 

CFU/ml môi 
trường 

phẩm.

trường nuôi cấy 
(ml)

nuôi cấy.

Nghiệm thức 1

760

3.79*1010

1050

2.74*1010

Nghiệm thức 2

761.7

5.62*1010

1050

4.08*1010

Nghiệm thức 3

763.3

3.23*1011

1050

2.35*1011

Nghiêm thức 4

765

3.49*1011

1050

2.54*1011

Nghiệm thức 5

753.3

3.72*1011

1050

2.67*1011


Biểu đồ 3.1. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch mật độ 
L. acidophilus khi lên men trên các môi trường có hàm 
lượng agar 5, 6, 7, 8, 16 (g/l).
CFU/ml
12
10
8
6
4
2
0

Hàm lượng agar 
(g/lít) .

KẾT LUẬN

Qua nghiên cứu nuôi cấy vi khuẩn L. acidophilus trên môi trường bán rắn, rút ra một số 
kết luận sau:
1.

Trong các nồng độ agar bán rắn khảo sát, nồng độ agar cho sinh khối tế bào cao nhất 
là 8 g/l.

2.

Hiệu suất nuôi cấy  trên môi trường rắn và bán rắn tương đương nhau: môi trường 
rắn đạt 2.67*1011 CFU/ml môi trường nuôi cấy, bán rắn đạt 2.54*1011 CFU/ml môi 
trường nuôi cấy.

3.

Có thể sử dụng phương pháp nuôi cấy  trên môi trường bán rắn (agar: 8 g/l) để nuôi 
cấy 

L. acidophilus thay thế cho phương pháp nuôi cấy trên môi trường rắn.


KIẾN NGHỊ
 Khảo sát theo thời gian khả năng giảm sút về mật độ tế 
bào của L. acidophilus nuôi cấy trên môi trường MRS bán 
rắn (sau khi cố định trên chất mang).