Báo cáo khóa luận tốt nghiệp: Bước đầu nghiên cứu nuôi cấy chủng Lactobacillus acidophilus trên môi trường bán rắn

TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT
KHOA SINH HỌC

   

BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHÓA 32

ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY CHỦNG LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS
TRÊN MÔI TRƯỜNG BÁN RẮN

GVHD: Ths. Hoàng Việt Hậu
SVTH:

Nguyễn Thị Phương Thủy


Mục tiêu đề tài

Xác định hàm lượng sinh khối L. acidophilus thu được khi lên men trên môi trường MRS bán
rắn, so sánh với lên men trên môi trường MRS rắn thông thường.


ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Chủng Lactobacillus acidophilus.

•

Nguồn: viện Human Hungary

•

Được cung cấp từ phịng cơng nghệ vi sinh trường Đại học
Đà Lạt.


BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM

NGHIỆM THỨC 1: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 5 (g/l).

NGHIỆM THỨC 2: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 6 (g/l).

NGHIỆM THỨC 3: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 7 (g/l).

NGHIỆM THỨC 4: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 8 (g/l).

NGHIỆM THỨC 5: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy trên môi trường rắn với hàm lượng agar 16 (g/l).


CHỦNG GIỐNG
PHỤC HỒI GIỐNG
CẤY PHÂN VÙNG
NHÂN GIỐNG CẤP 1

KIỂM TRA GIỐNG

QUY TRÌNH
THỰC HIỆN

LÊNMEN
MENBỀ

BỀMẶT
MẶT
LÊN

THU SINH KHỐI TẾ BÀO

CỐ ĐỊNH SINH KHỐI TẾ BÀO

SẤY VÀ XAY SINH KHỐI SAU CỐ ĐỊNH

KIỂM TRA MẬT ĐỘ VÀ HÌNH THÁI TẾ BÀO
L. ACIDOPHILUS CỦA SẢN PHẨM.


VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

VẬT LIỆU

• Mơi trường MRS ở các nghiệm thức
agar khác nhau.

PHƯƠNG PHÁP

• Phục hồi giống
• Cấy phân vùng
• Nhân giống cấp 1
• Lên men bề mặt
• Thu và cố định sinh khối tế bào
• Sấy và xay sau cố định.
• Kiểm tra mật độ và hình thái tế bào.

Hình 3.1. Kết quả phục hồi L. acidophilus


Hình 3.2. Kết quả cấy phân vùng L. acidophilus


Hình 3.3. MRS lỏng trước nhân giống

Hình 3.4. Kết quả nhân giống cấp 1
L. acidophilus


Kết quả kiểm tra mật độ tế bào L. acidophilus trước lên men

4.65*10

9

CFU/ml

7
> 10 CFU/ml.


Hình 3.5. Hình thái khuẩn lạc L. acidophilus


Hình 3.6. Hình thái tế bào L. acidophilus.

Hình 3.7. Kết quả lên men L. acidophilus trên mơi trường bán rắn


Hình 3.7. Kết quả lên men L. acidophilus trên mơi trường bán rắn


Hình 3.8. Kết quả lên men L. acidophilus trên mơi trường rắn



Hình 3.9. Sinh khối L. acidophilus được cố định trên bột mì.


Hình 3.10. Sinh khối L. acidophilus đã được cố định và sấy.


Hình 3.11. Chế phẩm L. acidophilus sau khi xay


Bảng 3.1. Khối lượng sản phẩm đạt được ở các nghiệm thức

NGHIỆM THỨC

LẦN 1

LẦN 2

LẦN 3

TRUNG BÌNH

(g)

(g)

(g)

(g)

750

768

762

760

755

764

766

761.7

760

765

765

763.3

765

763

767

765

750

752

758

753.3

Nghiệm thức 1
( agar: 5 g/l )

Nghiệm thức 2
( agar: 6 g/l )

Nghiệm thức 3
( agar: 7 g/l )

Nghiệm thức 4
( agar: 8 g/l )

Nghiệm thức 5
( agar: 16 g/l)


Bảng 3.2. Mật độ tế bào L. acidophilus nuôi cấy ở các nồng độ agar: 5, 6, 7, 8, 16 (g/l).

Định lượng mật độ tế bào sau khi cố định
Kết quả

Hàm lượng agar(g/l)

trung bình (CFU/g)
Lần 1

Lần 2

Lần 3

(CFU/g)

(CFU/g)

(CFU/g)

10

5

3.36*10

6

5.77*10

7

2.23*10

8

3.25*10

16

3.42*10

10

3.89*10

5.84*10

10

10

4.31*10

5.26*10

10

10

3.79*10

5.62*10

10

10

BÁN RẮN

RẮN

11

11

11

11

3.27*10

3.71*10

3.28*10

11

11

4.18*10

3.52*10

4.45*10

11

11

11

3.23*10

3.49*10

3.72*10

11

11

11

Bảng 3.3. Kết quả mật độ tế bào L. acidophilus trên một ml môi trường nuôi cấy.

Khối lượng
Nghiệm thức

CFU/g sản

Tổng thể tích mơi

CFU/ml mơi trường

phẩm.

trường ni cấy (ml)

ni cấy.

sản
phẩm(g)

10

Nghiệm thức 1

760

3.79*10

Nghiệm thức 2

761.7

5.62*10

Nghiệm thức 3

763.3

3.23*10

Nghiêm thức 4

765

3.49*10

Nghiệm thức 5

753.3

3.72*10

10

11

11

11

10

1050

2.74*10

1050

4.08*10

1050

2.35*10

1050

2.54*10

1050

2.67*10

10

11

11

11


Biểu đồ 3.1. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch mật độ
L. acidophilus khi lên men trên các môi trường có hàm lượng agar 5, 6, 7, 8, 16 (g/l).

CFU/ml

3
2.5
2
1.5
1
0.5
0

2.67

2.54
2.35

0.27

Column2

0.4 1

6

7

8

16

Hàm lượng agar (g/lít) .


KẾT LUẬN

Qua nghiên cứu nuôi cấy vi khuẩn L. acidophilus trên môi trường bán rắn, rút ra một số kết luận sau:

1.

Trong các nồng độ agar bán rắn khảo sát, nồng độ agar cho sinh khối tế bào cao nhất là 8 g/l.

2.

Hiệu suất nuôi cấy trên môi trường rắn và bán rắn tương đương nhau: môi trường rắn đạt 2.67*10
2.54*10

3.

11

CFU/ml mơi trường ni cấy.

Có thể sử dụng phương pháp nuôi cấy trên môi trường bán rắn (agar: 8 g/l) để nuôi cấy

L. acidophilus thay thế cho phương pháp nuôi cấy trên môi trường rắn.

11

CFU/ml môi trường nuôi cấy, bán rắn đạt


KIẾN NGHỊ

Khảo sát theo thời gian khả năng giảm sút về mật độ tế bào của L. acidophilus nuôi cấy trên môi trường
MRS bán rắn (sau khi cố định trên chất mang).